Methods in molecular biology (Clifton, N.J.) · 2022
Introducing Cysteines into Nanobodies for Site-Specific Labeling.
СтатьяНазвание и аннотация: Перевод в очереди
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Загрузка состояния…
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Hansen Simon Boje, Andersen Kasper Røjkjær
Аннотация
We have developed a generally applicable methodology for cysteine mutagenesis of nanobody (Nb) framework region serine residues. This strategy allows for subsequent labeling with thiol-reactive compounds without disrupting Nb antigen binding. We provide a protocol for production, labeling, and affinity determination of cysteine-engineered Nbs (cys-Nbs) with Alexa Fluor 488-maleimide and the mercury compound para-chloromercuribenzoic acid (PCMB). Alexa Fluor 488- and PCMB-labeled cys-Nbs can be used for immunofluorescence microscopy and experimental phasing in crystallography, respectively.