Methods in molecular biology (Clifton, N.J.) · 2023
Preparation of Recombinant Histones and Widom 601 DNA for Reconstitution of Nucleosome Core Particles.
СтатьяПоддержка исследования: вне правительства СШАПоддержка NIH: внешняя программаНазвание и аннотация: Перевод в очереди
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Загрузка состояния…
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Paintsil Emeleeta A, Morrison Emma A
Аннотация
Expression and purification of individual histone proteins and amplification and purification of DNA are the initial steps toward reconstituting nucleosome core particles. Histone proteins are expressed in E. coli, extracted from inclusion bodies, and purified using ion-exchange chromatography. DNA containing the 147 base pair Widom 601 sequence is amplified in bacteria using a plasmid containing multiple copies of this strong nucleosome positioning sequence. Following alkaline lysis of bacteria, DNA is extracted using phenol and chloroform, released from the vector via restriction enzyme digestion, and purified in subsequent precipitation and ion-exchange chromatography steps. Here, we describe a combination of two protocols: one to express and purify recombinant human histones and the other to amplify and purify Widom 601 DNA.