MedElevator
Войти в исследования Генетическая трансформация C. trachomatis Ocular Isolate с функциональным триптофаном Синтасе Operon Conferers a Indole-Safety Phenotype.
Аннотация
Хламидиотрахоматис является главной причиной предотвратимой слепоты и наиболее часто встречающейся бактериальной инфекции, передающей половым путем. Различные штаммы связаны с окулярными или врожденными инфекциями, и предложенным механизмом, который может объяснить этот тканевой тропизм, является активный биосинтезный путь триптофана, кодируемый геномным опероном ТрпРБА в врожденных штаммах. Здесь мы описываем генетические исследования по дополнению, которые необходимы для подтверждения роли триптофановой синтазы в контексте окулярного C. trachomatis геномного фона. Окулярный штамм A2497 был преобразован с (евро врожденным) PSW2::: GPF шаттл-вектор показывает, что нет тромбового барьера для этого пласмидного вектора; кроме того, преобразование не оказало негативного воздействия на кинетику роста A2497, что важно с учетом низкой эффективности преобразования C. trachomatis. производная PSW2: Вектор GPF использовался для получения активных биосинтезов триптофана от врожденного штамма C. trachomatis (Soton D1) до A2497 с целью дополнения усеченного гена trpa, общего для большинства окулярных штаммов. После подтверждения нетронутого белкового выражения TrpA в преобразованном A2497, полученные трансформанты выращивались в обезвоживаемой триптофаном среде с и без индола или триптофана, что свидетельствует о том, что дополняемость тропового гена нетронутым и функциональным врожденным опероном urovenal trpRBA была достаточной для того, чтобы нарастить гибридный фенотип на A2497. Это исследование доказывает, что PSW2: производные векторов GPF не соответствуют барьеру трансформации хламидийных челночных векторов, о котором сообщается для других хламидийных переносчиков, что говорит о том, что они являются универсальным вектором преобразования всех штаммов трахомати. Эта беспорядочность вектора позволила нам проверить гипотезу спасательной системы индол, преобразовав окулярный штамм A2497 функциональным врожденным опероном trpRBA, который дополнял нефункциональную синтазу триптофана. Эти данные подтверждают, что оперона ТРРБА необходима и достаточна для выживания хламидии в условиях, ограниченных триптофаном, таких, как женский врожденный тракт.
Название и аннотация на языке оригинала
Genetic Transformation of a C. trachomatis Ocular Isolate With the Functional Tryptophan Synthase Operon Confers an Indole-Rescuable Phenotype.
Chlamydia trachomatis is the leading cause of preventable blindness and the most common bacterial sexually transmitted infection. Different strains are associated with ocular or urogenital infections, and a proposed mechanism that may explain this tissue tropism is the active tryptophan biosynthesis pathway encoded by the genomic trpRBA operon in urogenital strains. Here we describe genetic complementation studies that are essential to confirm the role of tryptophan synthase in the context of an ocular C. trachomatis genomic background. Ocular strain A2497 was transformed with the (urogenital) pSW2::GFP shuttle vector showing that there is no strain tropism barrier to this plasmid vector; moreover, transformation had no detrimental effect on the growth kinetics of A2497, which is important given the low transformation efficiency of C. trachomatis. A derivative of the pSW2::GFP vector was used to deliver the active tryptophan biosynthesis genes from a urogenital strain of C. trachomatis (Soton D1) to A2497 with the aim of complementing the truncated trpA gene common to most ocular strains. After confirmation of intact TrpA protein expression in the transformed A2497, the resulting transformants were cultivated in tryptophan-depleted medium with and without indole or tryptophan, showing that complementation of the truncated trpA gene by the intact and functional urogenital trpRBA operon was sufficient to bestow an indole rescuable phenotype upon A2497. This study proves that pSW2::GFP derived vectors do not conform to the cross-strain transformation barrier reported for other chlamydia shuttle vectors, suggesting these as a universal vector for transformation of all C. trachomatis strains. This vector promiscuity enabled us to test the indole rescue hypothesis by transforming ocular strain A2497 with the functional urogenital trpRBA operon, which complemented the non-functional tryptophan synthase. These data confirm that the trpRBA operon is necessary and sufficient for chlamydia to survive in tryptophan-limited environments such as the female urogenital tract.
Предметные рубрики MeSH
Подготовка и перевод публикации
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Тип публикации указан по данным источника. Уровень доказательности автоматически не присваивается.