MedElevator
Войти в исследования Факторы, способствующие обнаружению РТ-QuIC природной семеноводческой деятельности.
Аннотация
Быстрое и чувствительное обнаружение прионов имеет важное значение для борьбы с прионными заболеваниями. В отношении многих прионовых заболеваний применяется анализ деятельности по выращиванию прионов, вызванный качком (RT-QuIC) в режиме реального времени, и предусматривается проведение конкретных предсмертных диагностических тестов. Мы провели оценку долгосрочной последовательности RT-QuIC и различных параметров множественной реакции. Повторяющиеся анализы одного образца скрипки с использованием нескольких считывающих пластин и рекомбинированного прионного белка (rprP(Sen)) дали сопоставимые результаты. N-терминальная усеченная хомячка rprP(Sen) (остатки 90-231) ускорила как реакцию на седалище, так и независимую от прионов, но сохранила четкое кинетическое различие между ними. Повышение температуры или скорости трясения ускорило реакцию RT-QuIC без ущерба для специфичности. При применении к носовой щетке пациентов, страдающих болезнью Креуцфельдт-Якоб, более высокие температуры ускорили кинетику RT-QuIC, а использование хомяка rprP(Sen) (90-231) усилило реакцию RT-QuIC. Удлинение периодов трясения сократило время реакции на скрипки, но постоянное дрожание способствовало ложной позитивной реакции. Кроме того, pH 7.4 обеспечивает более быструю реакцию RT-QuIC, чем более кислотные pH. Кроме того, мы показываем, что небольшие колебания в количестве сульфата натрия (СДС) существенно повлияли на результаты анализа. И наконец, RT-QUIC выполняется с помощью многотабельных термошокеров, за которыми следуют показания флуоресцирующих веществ на отдельных считывающих пластинах. В совокупности эти результаты свидетельствуют о повышении скорости, эффективности и практичности оценок RT-QuIC и высвечивают переменные, которые должны быть оптимизированы для будущих прикладных программ.
Название и аннотация на языке оригинала
Factors That Improve RT-QuIC Detection of Prion Seeding Activity.
Rapid and sensitive detection of prions is important in managing prion diseases. The real-time quaking-induced conversion (RT-QuIC) assay for prion seeding activity has been applied to many prion diseases and provides for specific antemortem diagnostic testing. We evaluated RT-QuIC's long-term consistency and varied multiple reaction parameters. Repeated assays of a single scrapie sample using multiple plate readers and recombinant prion protein (rPrP(Sen)) substrates gave comparable results. N-terminal truncated hamster rPrP(Sen) (residues 90-231) hastened both prion-seeded and prion-independent reactions but maintained a clear kinetic distinction between the two. Raising temperatures or shaking speeds accelerated RT-QuIC reactions without compromising specificity. When applied to nasal brushings from Creutzfeldt-Jakob disease patients, higher temperatures accelerated RT-QuIC kinetics, and the use of hamster rPrP(Sen) (90-231) strengthened RT-QuIC responses. Elongation of shaking periods reduced scrapie-seeded reaction times, but continuous shaking promoted false-positive reactions. Furthermore, pH 7.4 provided for more rapid RT-QuIC reactions than more acidic pHs. Additionally, we show that small variations in the amount of sodium dodecyl sulfate (SDS) significantly impacted the assay. Finally, RT-QuIC performed in multiplate thermoshakers followed by fluorescence readings in separate plate readers enhanced assay throughput economically. Collectively, these results demonstrate improved speed, efficacy and practicality of RT-QuIC assays and highlight variables to be optimized for future applications.
Предметные рубрики MeSH
Подготовка и перевод публикации
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Тип публикации указан по данным источника. Уровень доказательности автоматически не присваивается.