MedElevator
Войти в исследования Эффективное распространение варианта белка прионовой болезни Креуцфельдт-Якоб с использованием метода клеточного протеина с переплетением циклического амплификации с образцами, содержащими плазму и гепарин.
Аннотация
СПРАВОЧНАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Для предотвращения ятрогенического распространения заболевания Креуцфельдта-Якоба (vCJD) между людьми посредством продуктов крови или переливания необходимо провести весьма чувствительные анализы in vitro. Одним из таких тестов для кандидатов является переплетение протеина с циклической амплитификацией (PMCA). Однако, согласно сообщениям, плазма препятствует реакции PMCA. Поэтому мы изучили условия в клетках-PMCA, которые позволяют аплодировать vCJD prion в присутствии плазмы. ИССЛЕДОВАНИЕ И
МЕТОДЫ
Клеточные-PMCA пробы vCJD были выполнены путем добавления различных конечных концентраций объединенных плазм, цитрат-фосфат-дектроуз (CPD), альбумин, глобулин или соединенная плазма, обработанная ионными обменными устройствами. После оптимизации концентраций гепарина и плазмы было произведено многокамерное соединение клеток-PMCA.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Когда к гепаринизированным клеточным-PMCA добавлялись 1-50% объединенной плазмы, эффективность амплификации показала двойной пиковый профиль при концентрациях менее 1% и 40% конечной плазмы, что указывает на то, что плазма содержит не только ингибиторы PMCA, но и пропагандисты. Внутривенный глобулин не помешал клеточному PMCA, но белковая фракция G. КПИ, сломанная альбумином плазма и незакрепленная фракция хроматографии аниона-обмена интенсифицируют клетку-PMCA, но альбумин и незамысловатая фракция хроматографии катиона-обмена не смогли. Предел обнаружения аномального прионного белка в многокамерных клетках-PMCA при сохранении конечной концентрации плазмы на уровне 40% в каждом раунде составлял 10(-10) разбавления образца мозга vCJD.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Мы установили новый формат клеток-PMCA в присутствии плазмы без какой-либо предварительной обработки, где VCJD prion протеин был увеличен на сопоставимых уровнях с уровнем, обнаруженным без плазмы. Наши данные позволяют предположить, что клеточная PMCA является практическим тестом крови на прионы vCJD.
Название и аннотация на языке оригинала
Efficient propagation of variant Creutzfeldt-Jakob disease prion protein using the cell-protein misfolding cyclic amplification technique with samples containing plasma and heparin.
BACKGROUND
To prevent the iatrogenic spread of variant Creutzfeldt-Jakob disease (vCJD) between humans via blood products or transfusion, highly sensitive in vitro screening tests are necessary. Protein misfolding cyclic amplification (PMCA) is one such candidate test. However, plasma has been reported to inhibit the PMCA reaction. Therefore, we investigated the cell-PMCA conditions that permit vCJD prion amplification in the presence of plasma.
STUDY DESIGN AND
METHODS
Cell-PMCA of vCJD samples was performed by adding various final concentrations of pooled plasma, citrate-phosphate-dextrose (CPD), albumin, globulin, or pooled plasma treated with ion exchangers. After heparin and plasma concentrations were optimized, multiround cell-PMCA was performed.
RESULTS
When 1% to 50% of pooled plasma was added to heparinized cell-PMCA, amplification efficiency showed a double-peaked profile at less than 1% and 40% final plasma concentrations, indicating that plasma contains not only PMCA inhibitors but also promoters. Intravenous globulin did not inhibit cell-PMCA, but the protein G-bound fraction did. CPD, albumin-depleted plasma, and the unbound fraction of anion-exchange chromatography inhibited cell-PMCA, but albumin and the unbound fraction of the cation-exchange chromatography did not. The detection limit of abnormal prion protein in multiround cell-PMCA, when maintaining the final plasma concentration at 40% at each round, was 10(-10) dilutions of a vCJD brain specimen.
CONCLUSION
We have established a novel cell-PMCA format in the presence of plasma without any pretreatment, where vCJD prion protein was amplified at comparable levels to that found without plasma. Our data suggest the feasibility of cell-PMCA as a practical blood test for vCJD prions.
Предметные рубрики MeSH
Подготовка и перевод публикации
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Тип публикации указан по данным источника. Уровень доказательности автоматически не присваивается.