MedElevator
Войти в исследования Разработка и применение обратного транскрипционного анализа полимеразы на основе CRISPR/Cas12a с помощью бокового фильтра потока и флуоресцирующего обнаружения вируса Гета.
Аннотация
Вирус Гетаха (GETV) — переносимый комаром альфавирус, относящийся к зоонотической болезни, в основном заражает скот, особенно свиней и лошадей. В последние годы он вновь появился во многих азиатских странах, создавая потенциальную угрозу для животноводства и здоровья населения. В этом исследовании мы разработали быстрый и чувствительный метод обнаружения GETV, основанный на обратной транскрипции - рекомбиназы полимеразы (RT-RPA) и регулярном стыковке коротких палиндромных повторений (CRISPR)/Cas12a системы в сочетании с боковым фильтром потока (LFD) для визуального считывания. За счет сохранения последовательности в регионах белкового кодирования конвертов GETV E2 мы разработали соответствующие руководства CRNA и амплификации для разработки быстрого диагностического процесса CRISPR-Cas12a. Оптимизированная платформа сочетает RT-RPA (42°C/20 мин.) с транснуктной арендой Cas12a, что позволяет обнаруживать мультиплекс посредством количественной оценки флуоресцентной активности в режиме реального времени или визуализации иммунохроматографической полосы. Аналитическая оценка показала способность к обнаружению 10 копий/мл и исключительную специфичность в отношении четырех видов контроля за патогенами, включая японский энцефалит и псевдорабочий вирус. Проверка, проведенная с использованием смоделированных клинических образцов, выявила 100-процентное соответствие между результатами RT-RPA-CRISPR/Cas12a-LFD и количественной цепной реакции полимеразы (PCR), сократив общее время обнаружения до 50 минут. Этот подход устранил потребность в современных приборах в связи с их упрощенной оперативной конструкцией, что позволило создать на местах потенциал быстрого обнаружения, который позволил бы создать необходимую техническую инфраструктуру для принятия своевременных мер по сдерживанию ГЭТВ. Этот подход обладает широким практическим потенциалом в таких областях, как продовольственная безопасность, клиническая диагностика и экологическая наука.
Название и аннотация на языке оригинала
Development and application of a CRISPR/Cas12a-based reverse transcription-recombinase polymerase amplification assay with lateral flow dipstick and fluorescence detection for Getah virus.
Getah virus (GETV), a mosquito-borne alphavirus classified as a zoonotic disease, primarily infects livestock, particularly pigs and horses. In recent years, it has re-emerged in multiple Asian countries, posing a potential threat to animal husbandry and public health. In this study, we developed a rapid and sensitive GETV detection method based on reverse transcription-recombinase polymerase amplification (RT-RPA) and the clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)/Cas12a system combined with a lateral flow dipstick (LFD) for visual readout. By leveraging sequence conservation in the GETV E2 envelope protein-coding regions, we engineered matched crRNA guides and amplification primers to develop a rapid CRISPR-Cas12a diagnostic workflow. The optimized platform combines RT-RPA (42 °C/20 min) with Cas12a's trans-nuclease activity, permitting multiplex detection via real-time fluorescence quantification or immunochromatographic strip visualization. Analytical evaluation demonstrated a detection capability of 10 copies/µL and exclusive specificity against four pathogen controls, including Japanese encephalitis virus and pseudorabies virus. Validation performed using simulated clinical samples revealed 100% concordance between the results of RT-RPA-CRISPR/Cas12a-LFD and quantitative polymerase chain reaction (PCR), while reducing the total detection time to 50 minutes. This approach eliminated the need for advanced instrumentation owing to its simplified operational design, enabling field-deployable rapid detection capabilities that establish essential technical infrastructure for initiating timely GETV containment measures. This approach has broad application potential in the fields of food safety, clinical diagnostics, and environmental science.
Предметные рубрики MeSH
Подготовка и перевод публикации
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Тип публикации указан по данным источника. Уровень доказательности автоматически не присваивается.