В высшей степени специфическая антителная ассейза для обнаружения вируса Нипа Альфалиса.
Аннотация
Нипахский вирус (НиВ) представляет собой формирующийся зоонотический патоген, при помощи которого при помощи поверхностного гликпротеина (G) механизм вторжения в клетки приводит к смертельному энцефалиту у инфицированных пациентов (случай со смертельным исходом 40-75%). С учетом ограничений существующих диагностических технологий, таких, как низкая чувствительность и продолжительное время обработки, мы подготовили моноклонный антитело против NiV-G, чтобы создать новую систему обнаружения Applied Luminsing Proximity однородной ассазии (AlphalLISA). Во-первых, из селезенок мышей с помощью технологии клонирования цитометрии и одноклеточных клеток были выверены пять моноклонных антител с высоким содержанием NiV-G. Была проведена дальнейшая оптимизация системы реагирования, и был успешно сконструирован оптимальный коэффициент разбавления микросферы рецептора, биотинилированных антител и микросферы доноров, а также была успешно построена платформа обнаружения AlphALISA. Чувствительность белка NiV-G была в 0,024 нг/мл (41,7 раза выше, чем у обычного ELISA), коэффициент вариации составлял <9,5%, и повторение было хорошим. Он продемонстрировал высокую специфичность в обнаружении 5 зоонотических вирусов, включая японский энцефалит и вирус Зика. В то же время этот метод менее потревожен человеческой сывороткой, и время обнаружения составляет менее 30 минут, что свидетельствует о хорошей клинической перспективе.
Название и аннотация на языке оригинала
A Highly Specific Antibody-Based Assay for Nipah Virus AlphaLISA Detection.
Nipah virus (NiV) is an emerging zoonotic pathogen whose surface glycoprotein (G)-mediated host cell invasion mechanism leads to fatal encephalitis in infected patients (case fatality rate 40-75%). Given the limitations of existing diagnostic technologies, such as low sensitivity and prolonged processing times, we prepared an anti-NiV-G monoclonal antibody to establish a novel Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay (AlphaLISA) detection system. Firstly, five high-affinity anti-NiV-G monoclonal antibodies were screened from the spleens of immunized mice by flow cytometry-single-cell cloning technology. The reaction system was further optimized, and the optimal dilution ratio of antibody-conjugated receptor microspheres, biotinylated antibodies, and donor microspheres was screened, and the AlphaLISA detection platform was successfully constructed. The detection sensitivity of NiV-G protein was 0.024 ng/mL (41.7 times higher than that of conventional ELISA), the coefficient of variation was <9.5%, and the repetition was good. It showed good specificity in the detection of 5 zoonotic viruses, including Japanese encephalitis virus and Zika virus. At the same time, this method is less disturbed by human serum, and the detection time is less than 30 min, showing a good clinical application prospect.
Предметные рубрики MeSH
Подготовка и перевод публикации
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Тип публикации указан по данным источника. Уровень доказательности автоматически не присваивается.