MedElevator
Войти в исследования Быстрое и конкретное обнаружение всех известных вирусов Нипах последовательности с обратной транскрипцией - Loop-Mediad Isotermal Application.
Аннотация
Нипахский вирус (НиВ) является зоонотическим вирусом и может передаваться через зараженную пищу или непосредственно между людьми. NiV классифицируется как агент уровня 4 по биобезопасности не только из-за относительно высокой смертности, но и из-за отсутствия вакцины или других медицинских контрмер, которые, как представляется, передаются фомитами/партизанами. Разработка методов быстрого обнаружения для NiV имеет большое значение, поскольку в настоящее время отсутствуют эффективные полевые испытания. В этом исследовании был разработан метод обратной транскрипции (65 °C) с использованием изотермальной амплификации (RT-LAMP), ориентированный на ген нуклеокапсидного белка (N) для быстрого обнаружения NIV и сравниваемый с обычным RT-PCR. Три псевдовируса гена NiV N, представляющие все известные штаммы, были построены для замены живого NIV. Для выявления всех известных штаммов NIV был разработан набор RT-LAMP, предназначенный для высокоохранной области гена N в вирусном геноме. Испытания на чувствительность показали, что предел обнаружения RT-LAMP составляет приблизительно 100 пг от общего количества NiV псевдовируса RNA, что по меньшей мере в 10 раз выше, чем у обычного RT-PCR. Конкретные тесты показали, что не существует перекрестной реактивности с геном нуклеокапсида белка вируса Гендра, вирусом Ньюкасла, японским энцефалитом или вирусом гриппа А. Анализ RT-LAMP дает результаты в течение 45 минут и не требует сложных приборов, за исключением изотермальной водяной ванны или металлической ванны с индикатором 1 мкг кальцина. Анализ клинических образцов показал, что анализы хорошо стабильны. В заключение следует отметить, что систематические эксперименты показали, что анализ RT-LAMP, разработанный здесь, эффективно обнаруживает три псевдовируса NiV, представляющие все известные штаммы NiV, с высокой специфичностью, чувствительностью и стабильностью.
Название и аннотация на языке оригинала
Rapid and Specific Detection of All Known Nipah virus Strains' Sequences With Reverse Transcription-Loop-Mediated Isothermal Amplification.
Nipah virus (NiV) is a zoonotic virus and can be transmitted through contaminated food or directly between people. NiV is classified as a Biosafety Level 4 agent, not only because of its relatively high case fatality rate, but also because there is no vaccine or other medical countermeasures and it appears to be transmitted by fomites/particulates. The development of rapid detection assay for NiV is of great importance because no effective field test is currently available. In this study, an isothermal (65°C) reverse transcription-loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP) method was developed, targeting the nucleocapsid protein (N) gene, for the rapid detection of NiV, and was compared with conventional RT-PCR. Three pseudoviruses of NiV N gene representing all known strains were constructed to replace live NiV. A set of RT-LAMP primers, targeting a highly conserved region of the N gene in the viral genome was designed to identify all known NiV strains. Sensitivity tests indicated that the detection limit of the RT-LAMP assay was approximately 100 pg of total NiV pseudovirus RNA, which is at least 10-fold higher than that of conventional RT-PCR. Specificity tests showed that there was no cross-reactivity with nucleocapsid protein gene of Hendra virus, Newcastle disease virus, Japanese encephalitis virus, or Influenza A virus. The RT-LAMP assay provides results within 45 min, and requires no sophisticated instruments, except an isothermal water bath or metal bath with 1 μl calcein indicator. An analysis of the clinical samples showed that the assay had good stability. In conclusion, systematic experiments have shown that the RT-LAMP assay developed here effectively detects three NiV pseudoviruses representing all known strains of NiV, with high specificity, sensitivity and stability.
Подготовка и перевод публикации
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Тип публикации указан по данным источника. Уровень доказательности автоматически не присваивается.