MedElevator
Войти в исследования Разработка экспериментального производственного процесса и характеристика рекомбинантного японского энцефалитного пакета домена III белка, выраженного в Escherichia coli.
Аннотация
Японский энцефалит (JEV) является наиболее важной причиной энцефалита в большинстве азиатских регионов. В домене III JEV (JEV EDIII) белок участвует в связывании рецепторов, и он содержит конкретные эпитопы, которые вызывают антитела, нейтрализующие вирусы. Очень иммуногенный, рекомбинированный белок JEV EDIII был выражен в Escherichia coli. Для того чтобы взять этого кандидата на вакцину для дальнейших исследований, был произведен рекомбинантный белок JEV EDIII с использованием экспериментального процесса ферментации. Рекомбинантный белок JEV EDIII, выраженный в виде инклюзивных тел (IBs), был растворен в 8 M мочевинах и воссоздан в соответствии с протоколом повторного заплетения в колуме в присутствии глицерола. Был разработан трехэтапный процесс очистки, включающий хроматографию аффинации, хроматографию ионового обмена (ИЭК) на основе соли и ИЭК на основе pH. Около ~124 мг высокоочищенного и биологически активного белка ЭДИII было получено из 100 г биомассы. Биологическая функция очищенного белка ЭДИII была подтверждена их способностью генерировать конкретные антитела ЭДИII в мышах, которые могут нейтрализовать вирус. Эти выводы свидетельствуют о том, что рекомбинантный белок JEV EDIII в сочетании с совместимым аппендирантом является высоко иммуногенным и вызывает высокотитерную нейтрализацию антител. Таким образом, рекомбинантный белок JEV EDIII, производимый в больших масштабах, может быть потенциальным кандидатом на вакцину.
Название и аннотация на языке оригинала
Development of a pilot-scale production process and characterization of a recombinant Japanese encephalitis virus envelope domain III protein expressed in Escherichia coli.
Japanese encephalitis virus (JEV) is the most important cause of encephalitis in most Asian regions. JEV envelope domain III (JEV EDIII) protein is involved in binding to host receptors, and it contains specific epitopes that elicit virus-neutralizing antibodies. A highly immunogenic, recombinant JEV EDIII protein was expressed in Escherichia coli. In order to take this vaccine candidate for further studies, recombinant JEV EDIII protein was produced employing a pilot-scale fermentation process. Recombinant JEV EDIII protein expressed as inclusion bodies (IBs) was solubilized in 8 M urea and renatured by on-column refolding protocol in the presence of glycerol. A three-step purification process comprising of affinity chromatography, ion-exchange chromatography (IEX) based on salt, and IEX based on pH was developed. About ~124 mg of highly purified and biologically active EDIII protein was obtained from 100 g of biomass. Biological function of the purified EDIII protein was confirmed by their ability to generate EDIII-specific antibodies in mice that could neutralize the virus. These findings suggest that recombinant JEV EDIII protein in combination with compatible adjuvant is highly immunogenic and elicit high-titer neutralizing antibodies. Thus, recombinant JEV EDIII protein produced at large scale can be a potential vaccine candidate.
Предметные рубрики MeSH
Подготовка и перевод публикации
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Тип публикации указан по данным источника. Уровень доказательности автоматически не присваивается.