MedElevator
Войти в исследования Разработка инструментов молекулярного подтверждения для быстрой и легкой диагностики бешенства.
Аннотация
Поскольку бешенство по-прежнему представляет собой серьезную общественную угрозу, в результате которой ежегодно умирают десятки тысяч человек, особенно в развивающихся странах, важное значение имеет надлежащее наблюдение на основе быстрого и надежного диагностирования бешенства как у людей, так и у животных. Для выявления вирусных антигенов в диагнозе Рабиес используются весьма чувствительные и специальные лабораторные тесты. Среди этих тестов в настоящее время тест антител на иммунофлюоресценцию представляет собой «золотой стандартный тест» на диагностику бешенства, за которым следует изоляция вируса либо у мышей, либо у клеточной культуры. С учетом преимуществ молекулярного анализа с точки зрения чувствительности и применимости предусматривается их утверждение в качестве подтверждающего диагностического испытания международными организациями (МОС, ВОЗ). Поэтому цель заключалась в разработке и подтверждении новых молекулярных анализов и методов экстракции РНК для бешенства, которые сокращают время перехода, но остаются весьма чувствительными и конкретными. Вот, новые исследования, то есть. Были разработаны и испытаны высокоскоростная RT-qPCR и изотермальная рекомбиназа полимеразы (RPA). Кроме того, были утверждены три магнитных метода быстрой экстракции для ручной или автоматизированной экстракции, которые были объединены с новыми оценками на выходе.
Результаты
В то время как традиционный метод экстракции РНК на основе колонки показал самые высокие вариации внутри системы, все методы быстрой экстракции на основе магнитного буса обеспечили почти сопоставимую чувствительность и эффективность восстановления РНК. Все недавно разработанные молекулярные тесты позволили выявить различные штаммы вируса бешенства в значительно сокращенные сроки по сравнению со стандартными диагностическими анализами. Предел обнаружения для HighSpeed RT-qPCR составлял 10 копий генома на одну реакцию, и 1000 копий генома на одну реакцию для анализа PARA.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Быстрые методы экстракции РНК на основе магнитного борта являются весьма чувствительными и демонстрируют высокий уровень воспроизводимости и поэтому особенно пригодными для молекулярной диагностики, включая бешенство. Кроме того, при пределе обнаружения в 10 копий генома на реакцию, HighSpeed RT-qPCR подходит для быстрого диагностирования до смерти бешенства у людей, а также для проверки достоверности результатов комплексного управления укусами и последующей постэкспозиции.
Название и аннотация на языке оригинала
Development of molecular confirmation tools for swift and easy rabies diagnostics.
BACKGROUND
As rabies still represents a major public threat with tens of thousands of deaths per year, particularly in developing countries, adequate surveillance based on rapid and reliable rabies diagnosis for both humans and animals is essential. Rabies diagnosis relies on highly sensitive and specific laboratory tests for detection of viral antigens. Among those tests, at present the immunofluorescence antibody test is the "gold standard test" for rabies diagnosis, followed by virus isolation in either mice or cell culture. Because of the advantages of molecular assays in terms of sensitivity and applicability their approval as confirmatory diagnostic test by international organizations (OIE, WHO) is envisaged. Therefore, the objective was to develop and validate novel molecular assays and RNA extraction methods for rabies that reduce the turnaround time but remain highly sensitive and specific.
METHODS
Here, novel assays, i.e. HighSpeed RT-qPCR and isothermal recombinase polymerase amplification (RPA) were designed and tested. Furthermore, three magnetic bead-based rapid extraction methods for manual or automated extraction were validated and combined with the new downstream assays.
RESULTS
While the conventional column based RNA extraction method showed the highest intra-run variations, all magnetic bead-based rapid extraction methods delivered nearly comparable sensitivity and efficiency of RNA recovery. All newly developed molecular tests were able to detect different rabies virus strains in a markedly reduced timeframe in comparison to the standard diagnostic assays. The observed detection limit for the HighSpeed RT-qPCR was 10 genome copies per reaction, and 1000 genome copies per reaction for the RPA assay.
CONCLUSION
Magnetic bead-based rapid RNA extraction methods are highly sensitive and show a high level of reproducibility and therefore, are particularly suitable for molecular diagnostic assays including rabies. In addition, with a detection limit of 10 genome copies per reaction, the HighSpeed RT-qPCR is suitable for rapid ante mortem rabies diagnosis in humans as well as confirmatory test in integrated bite management and subsequent post-exposure prophylaxis.
Подготовка и перевод публикации
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Тип публикации указан по данным источника. Уровень доказательности автоматически не присваивается.