MedElevator
Войти в исследования Идентификация сохраненного серокомплекса B-клеточного эпитопа JEV с помощью скрининга пептидной библиотеки с MP, созданной против протеина вируса Западного Нила капсида.
Аннотация
Вирус Западного Нила (WNV) Capsid (C) является одним из трех вирусных структурных белков, изолирует вирусную РНК, образуя нуклеокапсид, и необходим для ядерной и нуклеолярной локализации. Антигенные пятна белка С, которые являются объектом юморальных иммунных реакций, не были тщательно изучены, и о четко определенных эпитопах B-клеток на белке WNV C не сообщалось. В этом исследовании мы создали моноколональную антителу WNV C (mAb) и определили линейную эпитопу, признанную mAb, с помощью скрининга 12-мерной пептидной библиотеки с использованием технологии fhage-display. MAb, названный как 6D3, распознал фаги, показывающие консенсусный мотив, состоящий из последовательности аминокислот KKPGGGG, которая идентична последовательности аминокислот, присутствующей в протеине WNV C. Было проведено дополнительное тонкое картирование с использованием усеченных пептидов, выраженных в виде белков MBP-Implement. Мы обнаружили, что мотив KKPGGGG является минимальным определяющим фактором линейного эпитопа, признанного mAb 6D3. Анализ западного пятна (ВБ) показал, что эпитопе KKPGGG может быть признан антителами, содержащимися в вирусе WNV- и японском энцефалите (JEV)-положительной сыворотке, но не был признан вирусом Денге 1-4 (DENV1-4)-позитивной сыворотке мышей. Кроме того, мы обнаружили, что эпитоп, признанный на 6D3, находится в высокой степени в серокомплексе семейства Флавивирида.
Заключение
KKPGGGG () — серокомплексный серокомплексный линейный эпоп B-клеток, который был признан 6D3 mAb, созданный в этом исследовании. 6D3 mAb может служить новым реагентом при разработке диагностических тестов на серокомплексную инфекцию JEV. Кроме того, идентификация эпитопа B-клеток, который в значительной степени сохраняется среди серокомплекса JEV, может служить обоснованием для разработки вакцин против вирусов серокомплекса JEV.
Название и аннотация на языке оригинала
Identification of a conserved JEV serocomplex B-cell epitope by screening a phage-display peptide library with a mAb generated against West Nile virus capsid protein.
BACKGROUND
The West Nile virus (WNV) capsid (C) protein is one of the three viral structural proteins, encapsidates the viral RNA to form the nucleocapsid, and is necessary for nuclear and nucleolar localization. The antigenic sites on C protein that are targeted by humoral immune responses have not been studied thoroughly, and well-defined B-cell epitopes on the WNV C protein have not been reported.
RESULTS
In this study, we generated a WNV C protein-specific monoclonal antibody (mAb) and defined the linear epitope recognized by the mAb by screening a 12-mer peptide library using phage-display technology. The mAb, designated as 6D3, recognized the phages displaying a consensus motif consisting of the amino acid sequence KKPGGPG, which is identical to an amino acid sequence present in WNV C protein. Further fine mapping was conducted using truncated peptides expressed as MBP-fusion proteins. We found that the KKPGGPG motif is the minimal determinant of the linear epitope recognized by the mAb 6D3. Western blot (WB) analysis demonstrated that the KKPGGPG epitope could be recognized by antibodies contained in WNV- and Japanese encephalitis virus (JEV)-positive equine serum, but was not recognized by Dengue virus 1-4 (DENV1-4)-positive mice serum. Furthermore, we found that the epitope recognized by 6D3 is highly conserved among the JEV serocomplex of the Family Flaviviridae.
CONCLUSION
The KKPGGPG epitope is a JEV serocomplex-specific linear B-cell epitope recognized by the 6D3 mAb generated in this study. The 6D3 mAb may serve as a novel reagent in development of diagnostic tests for JEV serocomplex infection. Further, the identification of the B-cell epitope that is highly conserved among the JEV serocomplex may support the rationale design of vaccines against viruses of the JEV serocomplex.
Предметные рубрики MeSH
Подготовка и перевод публикации
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Тип публикации указан по данным источника. Уровень доказательности автоматически не присваивается.