MedElevator
Войти в исследования Диагностический потенциал и антигенные свойства рекомбинированных тикающих энцефалитных субвирусных частиц, выраженных в млекопитающих клетках из репликонов вируса Семликийского леса.
Аннотация
Протеины прекурсора (prME) всех трех подтипов вируса энцефалита (TBEV) были произведены на основе репликонов вируса Семлики (SFV), перебранных из рекомбинантных плазмидов. Клетки Vero E6, передающиеся этими плазмидами, продемонстрировали конкретную повторную активность в иммунофлюоресцентных и иммуноглотных анализах моноклонных антител против европейских и дальневосточных подтипов ТБЭВ, что свидетельствует о правильном сложении выраженных гликпротеинов. Гликопротеины ПРМЕ были скрыты в клеточной культуре, образуя подвирусные частицы от 20 до 30 нм в диаметре. На основе частиц prME Karelia-94 (сибирский подтип) были разработаны IgM-mq-захват и IgG моноклонные антитела (MAb)-энзимные иммуномассы (ОВОС). На основе этих анализов было испытано в общей сложности 140 образцов сыворотки человека, и полученные результаты были сопоставлены с результатами, полученными в ходе коммерческой ОВОС IgM, внутреннего анализа на основе антигена, выраженного бакуловирусом, коммерческой ОВОС IgG и теста на ингибирование гемаглутинации. По сравнению со справочными оценками иммуносорбента, связанными с ферментами (ЭЛИСА), чувствительность генерируемых μ-похитителей IgM SFV-prME и IgG MAb-поглощающих SFV-prME ОВОС составляли соответственно 97,4-100% и 98,7%, а особенности этих двух оценок - 100%. IgM и IgG Imonfluorescence scases (IFA) были созданы на основе Vero E6 клеток, переработанных рекомбинантным плазмидом, в котором содержатся гликопротеины TBEV Carelia-94 prME. IgM IFA была на 100% совместима с IgM bac-prME ELISA. Чувствительность и специфичность IGG IFA составляли соответственно 98,7% и 100% по сравнению с коммерческим ELISA. В заключение следует отметить, что тесты, разработанные на основе репликонного выражения гликпротеинов ТБЭВ, обеспечивают безопасные и надежные альтернативы для проведения серологии ТБЭВ.
Название и аннотация на языке оригинала
Diagnostic potential and antigenic properties of recombinant tick-borne encephalitis virus subviral particles expressed in mammalian cells from Semliki Forest virus replicons.
The precursor membrane envelope (prME) proteins of all three tick-borne encephalitis virus (TBEV) subtypes were produced based on expression from Semliki Forest virus (SFV) replicons transcribed from recombinant plasmids. Vero E6 cells transfected by these plasmids showed specific reactivities in immunofluorescence and immunoblot assays by monoclonal antibodies against European and Far-Eastern subtype strains of TBEV, indicating proper folding of the expressed glycoproteins. The prME glycoproteins were secreted into the cell culture supernatant, forming TBEV subviral particles of 20 to 30 nm in diameter. IgM μ-capture and IgG monoclonal antibody (MAb)-capture enzyme immunoassays (EIAs) were developed based on prME Karelia-94 (Siberian subtype) particles. Altogether, 140 human serum samples were tested using these assays, and the results were compared to those obtained with a commercial IgM EIA, an in-house μ-capture IgM assay based on baculovirus-expressed antigen, a commercial IgG EIA, and a hemagglutination inhibition test. Compared to reference enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs), the sensitivities of the generated μ-capture IgM SFV-prME and IgG MAb-capture SFV-prME EIAs were 97.4 to 100% and 98.7%, respectively, and the specificities of the two assays were 100%. IgM and IgG immunofluorescence assays (IFAs) were created based on Vero E6 cells transfected with the recombinant plasmid carrying the TBEV Karelia-94 prME glycoproteins. The IgM IFA was 100% concordant with the μ-capture IgM bac-prME ELISA. The IgG IFA sensitivity and specificity were 98.7% and 100%, respectively, compared to those of the commercial ELISA. In conclusion, the tests developed based on SFV replicon-driven expression of TBEV glycoproteins provide safe and robust alternatives for conducting TBEV serology.
Предметные рубрики MeSH
Подготовка и перевод публикации
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Тип публикации указан по данным источника. Уровень доказательности автоматически не присваивается.