MedElevator
Войти в исследования DOI 10.1038/s41598-025-13128-7
Минигены усиливают гетерологическое выражение и предотвращают аберральное скрещивание мыши Spink1.
Аннотация
Инженер пищеварения трипсин является важным фактором развития и развития панкреатита. Ингибирование внутрипанкрейной активности трипсина является привлекательным, но пока безуспешным подходом к лечению и профилактике панкреатита. Генотерапия с использованием вирусного вектора, связанного с адено и содержащего ингибитор ингибитора серинового протеза человека типа 1 (SPINK1) показала эффективность гена против муслинового панкреатита в предклинических экспериментах. Для продвижения этого метода к клиническому тестированию необходимы вирусные векторы с улучшенным выражением ингибитора. В этом исследовании мы изучили влияние минигенов с однородными интронами на выражение гена мыши Spink1. Мы обнаружили, что микрогены заметно стимулировали выражение мыши Spink1 mRNA и SPINK1 белок в HEK 293T клетках, трансфекционированных плазмидами и AR42J поджелудочных клеток и изолированных мыши поджелудочной асини, преобразуемых аденовальными векторами. Оптимальным интроном для улучшения выражения было 100 нуклеотидов. Мы также продемонстрировали, что мышь Spink1 mRNA, выраженная из конструкции CDNA, подверглась фальшивому скрещиванию, и минигены предотвратили этот сверкающий дефект. Однако расширение выражения мыши Spink1 минигенами не связано с спасением аберрации mRNA. Эти наблюдения будут способствовать разработке передовых вирусных векторов, прикрывающих мышь Spink1 для проведения доклинических терапевтических исследований в мышиных моделях панкреатита.
Название и аннотация на языке оригинала
Minigenes enhance heterologous expression and prevent aberrant splicing of mouse Spink1.
The digestive enzyme trypsin is an important driver of pancreatitis development and progression. Inhibition of intrapancreatic trypsin activity is an attractive yet so far unsuccessful approach for the treatment and prevention of pancreatitis. Gene therapy using adeno-associated viral vector containing the human serine protease inhibitor Kazal type 1 (SPINK1) gene has shown efficacy against murine pancreatitis in preclinical experiments. To advance this method to clinical testing, viral vectors with improved inhibitor expression are needed. In this study, we investigated the effect of minigenes with single introns on the expression of the mouse Spink1 gene. We found that minigenes markedly stimulated the expression of mouse Spink1 mRNA and SPINK1 protein in HEK 293T cells transfected with plasmids and in AR42J rat pancreatic acinar cells and isolated mouse pancreatic acini transduced with adenoviral vectors. The optimal intron size for expression enhancement was 100 nucleotides. We also demonstrated that mouse Spink1 mRNA expressed from a cDNA construct underwent spurious mRNA splicing and minigenes prevented this splicing defect. However, enhancement of mouse Spink1 expression by minigenes was unrelated to the rescue of aberrant mRNA splicing. The observations will facilitate the development of advanced viral vectors harboring mouse Spink1 for preclinical therapeutic studies in mouse models of pancreatitis.
Предметные рубрики MeSH
Подготовка и перевод публикации
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Тип публикации указан по данным источника. Уровень доказательности автоматически не присваивается.