MedElevator
Войти в исследования Nuclear Fraction Proteome Analysis in the RAAV Production of AAV2-Plasmid-переносимые HEK-293 Cells.
Аннотация
Рекомбинантный адено-вирус (RAAV) является ведущим вектором для заместительной терапии; однако роль и регулирование хост-белков в производстве RAAV все еще не до конца поняты. В этом сравнительном протеомическом анализе мы сосредоточили внимание на белках в ядре, эпицентре поглощения ДНК, транскрипции, сборке капсида и упаковке. HEK-293 клетки были проанализированы в следующих трех условиях: i) нетрансформированные, ii) имитируемые с помощью ITR и не связанные с ним плазмиды и iii) тройные, трансформированные с помощью плазмидов производства RAAV2. Клетки собирались при 24-х и 72-х часах после трансплантации, а ядерные фракции обрабатывались с помощью фильтруемой системы подготовки проб (FASP), за которой следовали наномасштабная жидкая хроматография-тандем масс-спектрометрия (nLC-Orbitrap MS/MS). По всем образцам мы выявили 3384 белка, что выявило значительные изменения в регулировании, связанные с трансфекцией и производством RAV. Наиболее значительные протеомические изменения были вызваны одной лишь трансфекцией, в то время как производство RAV вызвало различные изменения в регулировании, связанные с контролем за клеточным циклом, структурой и метаболизмом. СТРАТИВНЫЙ анализ существенно регулируемых белков также выявил обогащение тех, кто связан с термином Gene Ontology (GO) «реагирование на вирус». Кроме того, мы изучили белки, которые, согласно сообщениям, имеют отношение к аденовальным компонентам. Наши выводы помогают разобрать сложность производства RAV, определить интересные цели для дальнейшего расследования и могут способствовать повышению урожайности RAV.
Название и аннотация на языке оригинала
Nuclear Fraction Proteome Analyses During rAAV Production of AAV2-Plasmid-Transfected HEK-293 Cells.
Recombinant adeno-associated virus (rAAV) is the leading vector for gene replacement therapy; however, the roles and regulation of host proteins in rAAV production remain incompletely understood. In this comparative proteomic analysis, we focused on proteins in the nucleus, the epicenter of DNA uptake, transcription, capsid assembly, and packaging. HEK-293 cells were analyzed under the following three conditions: (i) untransfected, (ii) mock-transfected with the ITR and an unrelated plasmid, and (iii) triple-transfected with rAAV2 production plasmids. Cells were harvested at 24 and 72 h post-transfection, and nuclear fractions were processed using filter-aided sample preparation (FASP) followed by nano-scale liquid chromatography-tandem mass spectrometry (nLC-Orbitrap MS/MS). Across all samples, we identified 3384 proteins, revealing significant regulatory changes associated with transfection and rAAV production. Transfection alone accounted for some of the most substantial proteomic shifts, while rAAV production induced diverse regulatory changes linked to cell cycle control, structure, and metabolism. STRING analysis of significantly regulated proteins also identified an enrichment of those associated with the Gene Ontology (GO) term 'response to virus'. Additionally, we examined proteins with reported relation to adenoviral components. Our findings help to unravel the complexity of rAAV production, identify interesting targets for further investigation, and may contribute to improving rAAV yield.
Предметные рубрики MeSH
Подготовка и перевод публикации
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Тип публикации указан по данным источника. Уровень доказательности автоматически не присваивается.