MedElevator
Войти в исследования Человеческий рекомбинант ламинированный белок: изоляция, очистка и кристаллизация.
Аннотация
MRNA прекурсора ламинированного белка (LBP) была изолирована от клеточной линии эмбриона человека и клонирована. Определённая последовательность гена LBP показала полную идентичность генов LBP, изолированных от легких человека и больших клеток кишечника. Человеческий LBP был выражен клетками Е. Коли, и он был очищен с использованием хроматографии Ni-NTA-Sepharose. Мобильность однородного рекомбинантного белка, связывающего человека с ламинами, на ПБ-ПАГЕ составила 43 кД. Смесь из восьми моноклонных антител, MPLR Board против LBP, отреагировала на рекомбинантный LBP в западном пятне. Взаимодействие антидидидиотипных антител 10H10 и E6B свидетельствует о том, что эпитоп, связывающий с белком E трансмиссивного вируса энцефалита (ТБЭ), также сохраняется на рекомбинантном LBP человека. Enzimemimonassay подтвердил способность рекомбинанта LBP взаимодействовать с белком E вируса TBE. Биологическая активность рекомбинанта LBP позволила нам провести рентгеновский анализ пространственной структуры молекулы LBP с использованием рекомбинантного белка. С этой целью кристаллы человека LBP были получены с помощью постоянной сбрасывающей версии метода диффузии пор. Размеры кристаллов, пригодных для рентгеновского структурного анализа, составляли 0,3 x 0,1 x 0,05 мм. Поле рентгеновского рассеивания кристалла увеличено до 2,5 А.
Название и аннотация на языке оригинала
Human recombinant laminin-binding protein: isolation, purification, and crystallization.
The mRNA of the precursor of laminin-binding protein (LBP) was isolated from a human embryo kidney cell line and cloned. The determined sequence of the LBP gene showed complete identity with the LBP genes isolated from human lung and large intestine cells. The human LBP was expressed by E. coli cells, and it was purified using Ni-NTA-Sepharose chromatography. The mobility of the homogeneous recombinant human laminin-binding protein on SDS-PAGE was 43 kD. A mixture of eight murine monoclonal antibodies, the MPLR Pool against LBP, reacted with the recombinant LBP in Western blot. The interaction of the antiidiotypical antibodies 10H10 and E6B provided evidence that the epitope binding to protein E of the tick-borne encephalitis (TBE) virus is also preserved on the human recombinant LBP. Enzyme immunoassay confirmed the ability of the recombinant LBP to interact with protein E of TBE virus. The biological activity of the recombinant LBP allowed us to perform X-ray analysis of the spatial arrangement of the LBP molecule using the recombinant protein. For this purpose, crystals of the human LBP were obtained by the standing drop version of the pore diffusion technique. The crystals appropriate for X-ray structural analysis were 0.3 x 0.1 x 0.05 mm in size. The X-ray diffraction field of the crystal extended to 2.5 A.
Предметные рубрики MeSH
Подготовка и перевод публикации
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Тип публикации указан по данным источника. Уровень доказательности автоматически не присваивается.