MedElevator
Войти в исследования DOI 10.1128/jcm.43.10.5102-5110.2005
Разработка мультиплексных ПЦР для обнаружения обычных вирусных патогенов и агентов врожденных инфекций.
Аннотация
Потенциальными причинами врожденной инфекции являются токсоплазма гонди и такие вирусы, как цитомегаловирус (CMV), энтеровирус, вирус гепатита С, герпес простейших вирусов 1 и 2 (HSV-1 и -2), герпесвирус 6, 7 и 8, вирус лимфоцита хориоменингита, парвовирус, вирус краснухи и вирус варицелла-зостера. Тестирование каждого из этих веществ с использованием анализа нуклеиновой кислоты занимает много времени, и наличие таких клинических образцов, как амниотическая жидкость или неонатальная кровь, зачастую ограничено. Цель этого исследования заключалась в разработке мультиплексных ПЦР (mPCRs) для обнаружения ДНК и агентов РНК в ходе исследования врожденной инфекции и МПКВ для вирусов, наиболее часто запрашиваемых в диагностической вирологической лаборатории (CMV, вирус Эпштейн-Барр, энтеровирус, HSV-1, HSV-2 и вирус варицелла-зостер). Анализы проводились с использованием известных патогенно-позитивных тканей (культуры, плацента, плазма и амниотическая жидкость), а пределы обнаружения были определены для всех агентов, изученных с помощью серийных разбавления плазмидов. Нестед ПЦР был проведен как наиболее чувствительный анализ, имеющийся в настоящее время, и обнаружение ампликонов с использованием гибридизации для маркированных зондов и иммуносорбента, связанного с ферментом, было включено в три из четырех анализов. Это позволило обнаружить от 10 до 10(2) копий каждого агента в обработанных образцах. У нескольких пациентов была диагностирована неожиданная инфекция, включая случай энцефалита, где HSV был первым клиническим подозрением, но был обнаружен CMV. В большинстве этих случаев альтернативный агент может быть подтвержден с помощью эталонной культуры, серологии или флуоресцирующих методов и имеет отношение к клиническому уходу за пациентом. Описанные здесь методы обеспечивают полезные методы диагностики врожденных инфекций и парадигму для оценки новых мультиплексных ПЦР для использования в диагностической лаборатории.
Название и аннотация на языке оригинала
Development of multiplex PCRs for detection of common viral pathogens and agents of congenital infections.
Potential causes of congenital infection include Toxoplasma gondii and viruses such as cytomegalovirus (CMV), enterovirus, hepatitis C virus, herpes simplex virus types 1 and 2 (HSV-1 and -2), human herpesvirus types 6, 7, and 8, lymphocytic choriomeningitis virus, parvovirus, rubella virus, and varicella-zoster virus. Testing for each of these agents using nucleic acid tests is time consuming and the availability of clinical samples such as amniotic fluid or neonatal blood is often limited. The aim of this study was to develop multiplex PCRs (mPCRs) for detection of DNA and RNA agents in the investigation of congenital infection and an mPCR for the viruses most commonly requested in a diagnostic virology laboratory (CMV, Epstein-Barr virus, enterovirus, HSV-1, HSV-2, and varicella-zoster virus). The assays were assessed using known pathogen-positive tissues (cultures, placentae, plasma, and amniotic fluid) and limits of detection were determined for all the agents studied using serial dilutions of plasmid targets. Nested PCR was performed as the most sensitive assay currently available, and detection of the amplicons using hybridization to labeled probes and enzyme-linked immunosorbent assay detection was incorporated into three of the four assays. This allowed detection of 10 to 10(2) copies of each agent in the samples processed. In several patients, an unexpected infection was diagnosed, including a case of encephalitis where HSV was the initial clinical suspicion but CMV was detected. In the majority of these cases the alternative agent could be confirmed using reference culture, serology, or fluorescence methods and was of relevance to clinical care of the patient. The methods described here provide useful techniques for diagnosing congenital infections and a paradigm for assessment of new multiplex PCRs for use in the diagnostic laboratory.
Предметные рубрики MeSH
Подготовка и перевод публикации
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Тип публикации указан по данным источника. Уровень доказательности автоматически не присваивается.