MedElevator
Войти в исследования Обнаружение вируса лимфоцита хориоменингита путем использования фторгенного анализа обратной транскрипции-полимеразы.
Аннотация
Вирус лимфоцита хориомингита (LCMV) вызывает стойкие инфекции у мышей-лаборантов; является известным загрязнителем биологических материалов, таких, как трансплантируемые клеточные линии опухолей; и вызывает большую озабоченность у животных в связи с их зоонотическим потенциалом. Флюорогенная нуклеарная реакция обратного транскрипции-полимеразы (FnRT-PCR) сочетает RT-PCR с внутренним фторогенным гибридным зондом, что потенциально повышает специфичность и устраняет процесс обработки после PCR. Таким образом, анализ FnRT-PCR, специфический для LCMV, был разработан путем адресации последовательности профилей и зондов в уникальный регион гена LCMV нуклеокапсид (NP). В исследовании FnRT-PCR LCMV были обнаружены только LCMV и не были обнаружены другие RNA вирусы, которые естественным образом инфицируют грызунов. Анализ FnRT-PCR выявил лишь одну пикограмму LCMV RNA, но был в 100 раз менее чувствительным по сравнению с тестом на производство антител мыши. Анализ FnRT-PCR также позволил обнаружить вирусную РНК в многочисленных тканях, а также в фекалиях и клетках, взятых из экспериментально вакцинированных мышей BALB/c, но не выявил никакой вирусной РНК в аналогичных образцах, собранных из мышей, инфицированных в возрасте и в штампе. В заключение следует отметить, что результаты анализа, проведенного ЛСМВФ-ФНРТ-ПКР, дают возможность получить потенциально высокую диагностическую оценку с целью обнаружения ЛХМВ в мышах и загрязненных биологических материалах.
Название и аннотация на языке оригинала
Detection of lymphocytic choriomeningitis virus by use of fluorogenic nuclease reverse transcriptase-polymerase chain reaction analysis.
Lymphocytic choriomeningitis virus (LCMV) induces persistent infections in laboratory mice; is a known contaminant of biological materials, such as transplantable tumor cell lines; and is of great concern in animal facilities due to its zoonotic potential. Fluorogenic nuclease reverse transcriptase-polymerase chain reaction (fnRT-PCR) assays combine RT-PCR with an internal fluorogenic hybridization probe, thereby potentially enhancing specificity and eliminating post-PCR processing. An fnRT-PCR assay specific for LCMV was, therefore, developed by targeting primer and probe sequences to a unique region of the LCMV nucleocapsid (NP) gene. The LCMV fnRT-PCR assay detected only LCMV and did not detect other RNA viruses that naturally infect rodents. The fnRT-PCR assay detected as little as one picogram of LCMV RNA, but was 100-fold less sensitive when directly compared with the mouse antibody production test. The fnRT-PCR assay was also able to detect viral RNA in numerous tissues and in feces and cage swipe specimens collected from experimentally inoculated BALB/c mice, but did not detect any viral RNA in similar samples collected from age- and strain-matched mock-infected mice. In conclusion, the LCMV fnRT-PCR assay offers a potentially high-throughput diagnostic assay to detect LCMV in mice and contaminated biological materials.
Предметные рубрики MeSH
Подготовка и перевод публикации
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Тип публикации указан по данным источника. Уровень доказательности автоматически не присваивается.