Сравнительная оценка вируса адено и чечевируса привносила передачу генов во взрослый крысиный оптический нерв.

оптический нерв служит жизненно важным каналом визуального сигнала, а его дегенерация в оптической нейропатии приводит к необратимой потере зрения. Она также широко используется для изучения травматизма и ремонта центральной нервной системы (СНС). Хотя вирус адено и чечевирус широко применяются в исследованиях CNS, эффективность их трансдукции и специфичность клеточного типа в зрительном нерве по-прежнему незначительны. Цель этого исследования состояла в том, чтобы определить наиболее эффективный вирусный вектор, серотип и промоутер для прямой передачи генов во взрослого крысиного зрительного нерва.

МЕТОДЫ

Крысы Спраги-Доули (7-10 недель) получили внутриоптические инъекции чечевиц или векторов AAV, кодирующие GPF под различными стимуляторами (CAG, CMV или GFAP). От двух до трех недель после инъекции были собраны оптические нервы для иммуногистохимии с маркерами олигодендроцитов (Olig2), астроцитов (GFAP, Sox9) и микроглии (IBA1). Эффективность трансдукции и специфичность клеток оценивались с использованием конфокальной микроскопии.

Результаты

AAV2, AAV5, и чечевица продемонстрировали минимальную трансдукцию, при этом вблизи мест инъекции были обнаружены лишь незначительные клетки с положительной реакцией на GPF. С другой стороны, AAV-PHP.eB, на котором находился пропагандист CAG, произвело сильное и широко распространенное выражение GPF рядом с местом инъекции. Количественный анализ показал, что примерно 90% трансформированных клеток были олиг2-положительными олигодендроцитами, что свидетельствует о сильном тропизме для этой глиальной популяции.

Заключение

AAV-PHP.eB, приводимый в действие пропагандистом CAG, позволяет эффективно передавать гены оптическим нервам с доминирующим тропизмом для олигодендроцитов. Этот целевой внутриоптический подход к инъекции нерва обеспечивает надежную платформу для манипулирования олигодендроцитами и изучения механизмов развития, травматизма и ремонта CNS, имеющих отношение как к оптическим нейропатиям, так и к другим заболеваниям CNS.