MedElevator
Войти в исследования Внутримышечное впрыскивание RAAV2-retro для низкоскоростной нейронной трансдукции: оценка пяти пропагандистов.
Аннотация
Рекомбинантные вирусные векторы (RAAV) могут эффективно передавать трансген в нервную систему. Выбор серотипа и промоутера AAV существенно влияет на динамику трансгенского выражения, включая его прочность и специфичность клеток. Предыдущие исследования показали, что у неонатальных мышей внутримышечная (IM) инъекция вектора rAAV2-retro может эффективно доставлять трансген в нижние моторные нейроны (LMN) мозговой стержни и спинного мозга. Тем не менее, лучший стимулятор выражения трансгена в центральной нейронной системе (КНС) с использованием rAAV2-retro остается неопределённым. В этом исследовании были сопоставлены пять широко используемых пропагандистов, включая фосфоглицерат мыши (mPGK), CMV ранний усилитель/цыпленок β-актин/короткий β-Глобулин интрон (CAG), человеческий цитомегаловир (HCMV), куриный β-актин (CBA) и человеческий синапсин (hSyn). У новорожденных мышей C57BL/6J была произведена инъекция векторов РААВ2-ретро, упакованных с конструкциями репортеров, содержащих каждого промоутера. Уровни генного экспрессии и типы клеток были изучены с использованием методов освещения световых листов и конфокальной микроскопии. Наши результаты показали, что RAAV2-ретро в основном нацелились на мозговую стержень и позвоночник внутри CNS. Среди пяти обследованных пропагандистов, CAG и hCMV продемонстрировали самое высокое генное выражение. Почти все заражённые клетки были идентифицированы как ЛМН. Кроме того, было установлено, что генное выражение под воздействием hCMV зависит от включения элементов РГРЕ и β-Глобина. Важно то, что ни один из пропагандистов не вызвал гепатотоксичность, обеспечив безопасность РААВ2-ретромодернизированного выражения. Это исследование позволило получить ценную информацию для оптимизации системы передачи РААВ2-ретромодифицированных генов ЛМН в мозговой сетке и спинном мозге, что может иметь потенциальные последствия для исследований заболеваний, связанных с моторными нейронами.
Название и аннотация на языке оригинала
Intramuscular Injection of rAAV2-retro for Low Motor Neuron Transduction: Evaluating Five Promoters.
Recombinant adeno-associated viral vectors (rAAVs) can effectively deliver transgene to the nervous system. The selection of AAV serotype and promoter significantly influences the dynamics of the transgene expression, including its strength and cell-specificity. Previous studies demonstrated that in neonatal mice, the intramuscular (IM) injection of the rAAV2-retro vector could efficiently deliver transgene to lower motor neurons (LMNs) of the brainstem and spinal cord. However, the best promoter for the expression of transgene in the central neural system (CNS) using rAAV2-retro remains undetermined. This study compared five commonly used promoters, including mouse phosphoglycerate kinase (mPGK), CMV early enhancer/chicken β-actin/short β-globulin intron (CAG), human cytomegalovirus (hCMV), chicken β-actin (CBA), and human synapsin (hSyn) promoters. The IM (unilateral gastrocnemius muscle) injection of rAAV2-retro vectors packaged with the reporter constructs containing each promoter was performed in the newborn C57BL/6J mice. The levels of gene expression and the types of cells were examined using the light-sheet illumination imaging technique and confocal microscopy. Our findings revealed that rAAV2-retro primarily targeted the brainstem and spinal cord within the CNS. Among the five promoters tested, CAG and hCMV showed the highest gene expression. Almost all the transduced cells were identified as LMNs. Additionally, gene expression driven by hCMV was found to be dependent of the inclusion of WPRE and β-globin intron elements. Importantly, none of the promoters induced hepatotoxicity, ensuring the safety of rAAV2-retro-mediated expression. This study provided valuable insights for optimizing the rAAV2-retro-mediated gene delivery system to LMNs in the brainstem and spinal cord, which might have potential implications for research on motor neuron-related diseases.
Предметные рубрики MeSH
Подготовка и перевод публикации
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Тип публикации указан по данным источника. Уровень доказательности автоматически не присваивается.