Methods in molecular biology (Clifton, N.J.) · 2020
Analysis of Trinucleotide Repeat Stability by Integration at a Chromosomal Ectopic Site.
СтатьяПоддержка NIH: внешняя программаПоддержка исследования: вне правительства СШАНазвание и аннотация: Перевод в очереди
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Загрузка состояния…
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Gadgil Rujuta Yashodhan, Rider S Dean, Lewis Todd, Barthelemy Joanna, Leffak Michael
Аннотация
Expansions of CNG microsatellite tracts are responsible for several neurodegenerative diseases, including myotonic dystrophy type 1, Huntington disease, and spinocerebellar ataxia type 8. Here we show that expanded (CNG)n repeats are susceptible not only to expansions and contractions, but are prone to DNA double strand breaks following replication stress. We describe a general strategy for the construction of clonal cell lines containing CNG repeats of various lengths, in which the microsatellites are integrated using the yeast FLP recombinase at a single ectopic recombination acceptor site in the HeLa genome. We illustrate two types of (CTG/CAG) cell lines, one of which contains dual fluorescent marker genes flanking the (CTG/CAG) repeat, and one which does not. We show that long CNG repeats are prone to DNA double strand breaks (DSBs) upon exposure of these cell lines to prolonged replication stress.