Методика определения поверхности чувствительности для оптимизации выражения CHIKV-SFv-BAD против E2 в Escherichia coli Origami B (DE3) для обнаружения вируса Чикунгунья.

Вирус Чикунгунья (CHIKV) является патогеном, передаваемым через комары, который несет ответственность за повторяющиеся вспышки, что подчеркивает потребность в оперативных и точных диагностических инструментах. Гликпротеин E2 CHIKV является перспективной целью для обнаружения на базе антител. Цель этого исследования заключается в определении оптимальных условий выражения рекомбинированного одноцепного изменяющегося фрагмента (scFv), сплавленного с доменом принятия биотинов (BAD), специфичным для CHIKV E2 glycoprotein в Escherichia coli Origami B (DE3). Оптимизация была произведена с использованием модели " Box-Behnnken " ( " Box-Behenken " ) методологии определения поверхности чувствительности (RSM) с концентрацией индукционного индукциониста IPGT, временем впуска и температурой впуска в качестве независимых переменных. Оптимальные условия были определены как 0,2 мМ IPGT, 2 часа индукции при 37 °C, в результате чего общая концентрация белка составляет 0,658 мг/мл. Растворимая фракция SFv-BAD была успешно очищена с помощью хроматографии Ni2+-NTA с чистотой 91,11%. ЭЛИСА подтвердила, что рекомбинант scFv-BAD был биотинилирован и сохранил свою способность связывать антиген CHIKV E2. Оптимизированная конструкция SFv-BAD демонстрирует потенциал для использования на различных иммунизационных платформах, включая быстрые диагностические тесты на обнаружение CHIKV.