Двухтрубный мультиплексный RT-PCR в реальном времени для обнаружения четырех геморрагических вирусов лихорадки: сильная лихорадка с вирусом тромбоцитопенсии, вирус Хантаана, вирус Сеула и вирус денге.

Цель этого исследования заключалась в разработке и оценке двухтрубного мультиплексного анализа RT-PCR в режиме реального времени для обнаружения и идентификации четырех вирусных геморрагических патогенов (VHF), острой лихорадки с вирусом тромбоцитопенсии (SFTSV), вируса Хантаан (HTNV), сеульского вируса (SEOV) и вируса денге (DENV) из клинических образцов человека. Двухтрубный мультиплексный анализ RT-PCR в реальном времени, который мы разработали, имеет чувствительность 10 копий/мл для каждой цели, и производительность была линейной в диапазоне не менее 10 (7) копий стенограмм. Кроме того, мы оценили специфичность анализа с использованием других вирусных РНК в качестве шаблона и не обнаружили перекрестной реактивности. Этот новый анализ позволяет обнаруживать SFTSV, HTNV, SEOV и DENV в двух реакциях и влечет за собой 40% затрат по сравнению с отдельными реакциями. Оценка этого анализа с использованием образцов клинической сыворотки пациентов, прошедших лабораторную проверку, и здоровых доноров показала 100-процентную чувствительность к клинической диагностике и более 99-процентную специфичность. Результаты анализа были использованы для сканирования 346 клинических образцов, собранных у пациентов, помещенных в больницу с подозрением в наличии ОВЧ, по сравнению с данными об изоляции от вируса и иммунной флюоресценции (IFA). В ходе анализа было выявлено 59 образцов SFTSV-, 12 HTNV-, 11 SEOV- и 9 образцов DENV-положительных, и они продемонстрировали более высокую чувствительность. Таким образом, этот анализ является надежным и эффективным с точки зрения затрат инструментом для ранней клинической диагностики SFTSV, HTNV, SEOV и DENV в острой фазе.