Условия для гемолиза флавивирусами и характеристики гемолисинов.

17D штамм вакцины от вируса желтой лихорадки (YF 17D) был использован для создания оптимальных условий для лиза цыплята эритроцитов. Культурно выращенный полиэтиленовый гликоль-концентрированный вирус продемонстрировал пиковую активность при pH 5,4 в цитратном буфере, когда он инкубировался при 37 градусах С. Еще в два-четыре раза больше титров было получено в результате предварительной обработки цыплят эритроцитами 250 микрограмм/мл трипсина. Эти условия также оказались оптимальными для японского энцефалита (JE), Западного Нила (WN) и денге-2 (den2). Соотношение между гемагглютинацией (HA) и гемолизом (HL) титре приблизительно соответствует единству, что предполагает, что эти две функции связаны с одной и той же молекулой, хотя и как отделимые части после селективного ин активации деятельности HL вируса с использованием 60 микрограмм/мл трипсина. HL может быть продемонстрирован при нейтральном pH, если цыпочки с эритроцитами сначала подвергаются обработке с помощью кислого буфера pH. Таким образом, воздействие на вирусный конверт не является единственным вкладом среды с низким содержанием pH в оптимальный уровень HL. Гипериммунная антисеремия кролика, подготовленная против очищенных вирионов YF 17D, ингибировала HA и HL, если она была добавлена до того, как вирус вызвал агглутинацию, но когда она была добавлена после агглутиляции, она выявила специфическую антиHL-активность. Моноклональные антитела, которые ингибировали HA (HAI) с помощью YF 17D, не препятствовали деятельности HL (HLI), когда она была применена после агглютиляции. Кроме того, моноколональные антитела, специфические для 54K гликпротеина вируса YF, но без активности HAI, также не повлияли на HL, когда были добавлены до или после агглутинации. До сих пор мы не смогли выявить моноколональную антителу, демонстрирующую конкретную антиHL-активность, но все те, которые были направлены против 54K конверта с гликпротеином, обладающим активностью HAI, показали, что HA является предварительным условием для HL.