Связанная с аптамером колориметрическая реверсная транскрипция с помощью петли изотермальной апплификации для обнаружения вируса денге.

UNLABELLED: Текущие методы диагностики денге, такие, как серологические тесты, имеют ограничения с точки зрения перекрестной реактивности с другими вирусами. Для решения этой проблемы мы изучили возможность сочетания метода изотермальной амплификации (LAMP) с использованием петли и аптмеров для разработки тестов на место. В этом исследовании мы использовали 60 образцов сыворотки. В качестве платформы для улавливания генетического материала использовался аптамер, способный связывать вирус денге, и его производительность была сопоставлена с коммерческим комплектом. Вирус денге был обнаружен с помощью RT-PCR и колориметрической обратной транскрипции с помощью изотермальной амплификации (RT-LAMP), позволяющей визуально наблюдать результаты без необходимости в оборудовании. В контексте анализа Aptamer LAMP наш анализ показал обнаружение вируса денге в 38 из 60 образцов с 95-процентной чувствительностью и 100-процентной специфичностью по сравнению с RT-PCR и/или ATTA-RT-PCR. Важно то, что мы не заметили перекрестной реакции при оценке образцов положительной реакции на вирус " зика " , что подчеркивает избирательность анализа. Этот инновационный аптамерикский захват вирусной РНК в сочетании с методом RT-LAMP (APTA-RT-LAMP) может дать ценное молекулярное представление о забытых инфекционных заболеваниях более простым и быстрым образом. ВАЖНОСТЬ: Денге является забытым тропическим заболеванием, имеющим большое эпидемиологическое значение в тропических и субтропических странах. Текущая диагностика этой инфекции сопряжена с такими проблемами, как перекрестная реактивность при серологических тестах. Учитывая отсутствие конкретных методов лечения, крайне важно найти пути улучшения диагностики этого заболевания. Точная, простая и эффективная диагностика способствует совершенствованию управления инфицированными людьми. В этом контексте наша работа сочетает молекулярные биологические методы, такие, как изотермальная амплитация петли, с аптамерами для обнаружения вируса денге в биологических образцах. Наш метод дает колориметрические результаты, основанные на изменении цвета, с результатами менее чем за 2 часа. Кроме того, для этого требуется более простое оборудование по сравнению с молекулярными ПЦР-тестами.