Перенос и окончательное высвобождение мини-Ф вектора клонированного инфекционного герпесвирусного генома.

Бактериальные искусственные хромосомы (КБК) являются хорошо зарекомендовавшими себя средствами клонирования для функциональной геномики и для построения целевых векторов и инфекционных вирусных клонов ДНК. Методы мутагенеза, основанные на рекомбинации красного цвета, позволили манипулировать BAC в Escherichia coli без каких-либо оставшихся операционных последовательностей. Здесь мы описываем, что векторные последовательности, полученные с помощью F-факторов, могут быть вставлены в новое положение и бесперебойно удалены из нынешнего местоположения клонированной ДНК BAC посредством синхронизации красной рекомбинации в E. coli в рамках процедуры, основанной на en пассантных мутагенез. Используя этот метод, мини-Ф элементы клонированного инфекционного варицелла зостерного генома (VZV) были специально перенесены в новые позиции, распределенные по вирусной ДНК, чтобы создать шесть различных вариантов BAC. По сравнению с другими конструкциями, вариант БАК с мини-Фекциями, непосредственно вставленными в соединение геномных терминалов, привел к высокоэффективному репродукции вирусных ДНК при спонтанной эксцизии векторов на реконституции вируса в трансфектированных эукариотических клетках VZV. Кроме того, производная бесперебойная рекомбинация потомства показала практически неразличимые свойства генома и воспроизводство кинетики вируса диких видов. Таким образом, процедура последовательности, независимая, эффективная и легко применяемая векторная транспонирование мини-Ф устраняет последнее препятствие для осуществления практически любого воображаемого целевого изменения БАК в E. coli. Геномический геномический герпесвильский комплекс был назван оптимальным интеграционным участком мини-Ф для создания инфекционного БАК, что позволяет быстро генерировать вирус мутанта без каких-либо нежелательных вторичных изменений генома. Новейший метод мини-Ф транспонирования может быть ценным инструментом оптимизации, ремонта или перестройки других установленных БАК, а также может способствовать развитию генной терапии или векторов вакцин.