MedElevator
Войти в исследования Разработка мини-герпесвируса в качестве общей стратегии по доведению до 180 кБ функциональных самовоспроизводящих мини-хромосом человека.
Аннотация
Для разработки терапевтических искусственных хромосом для человека (HAEC) требуется разработка стратегий, позволяющих получить большую функциональную самовоспроизводящуюся экстрахромосомную ДНК в целевых клетках. Члены герпесвильского семейства относятся к числу самых крупных эписомальных двухструнных вирусов ДНК. В качестве образцовых систем этого семейства эндемических инфекционных агентов были построены векторы, полученные из вируса 4 Epstein-Barr (EBV), которые перевели до 180 кБ ДНК, упакованных как инфекционные вироны. Такая стратегия трансдукции основывалась на некогенном мини-ЭБВ, имеющем минимальный размер резьбы для скрытого воспроизведения и производства вирусов. После воздействия лимфомы и лимфобаластоидных клеток человека на микроЭБВ, приводящие к образованию лацЗ и микрогенов ГПРТ, были отобраны стабильные трансформанты клеток, которые несли поставляемые многомерные линейные ДНК в виде круговых эписомов размером до 160-180 кБ. После трансдукции клеток болезни Леш-Нихан с мини-ЭБ/ГДРТ нормальная функция человека HPRT была восстановлена в клетках с большими эписомальными микрогенами HPRT. Прямая визуализация терапевтического мини-ЭБВ путем флуоресцентной гибридизации in situ (FISH) на метафазе и межфазных ядрах показала, что 99% (556/563) продуцированной ДНК мини-ЭБВ были эпизомичной с средним числом копий от одного до двух на ядро. Эта система должна обеспечивать возможность передачи крупных генов в таких распространенных заболеваниях, как гемофилия А, и одновременного доставки нескольких генов в клетки от таких полигенных заболеваний, как рак. Внехромосомная мини-ЭБВ стратегия предлагает альтернативу интегрированным или не воспроизводящимся генной терапии инфекционным векторам, которые могут быть в целом применимы к другим герпесвирусам, характеризующимся различными трпизмами.
Название и аннотация на языке оригинала
Engineering a mini-herpesvirus as a general strategy to transduce up to 180 kb of functional self-replicating human mini-chromosomes.
The engineering of therapeutic human artificial episomal chromosomes, HAECs, requires the development of strategies to deliver large functional self-replicating extrachromosomal DNA in target cells. Members of the herpesviral family are among the largest episomal double-stranded DNA viruses. As model systems of this family of endemic infectious agents, vectors derived from the human herpes 4 Epstein-Barr virus (EBV) were constructed which transferred up to 180 kb of DNA packaged as infectious virions. Such a transduction strategy was based on a non-oncogenic helper-dependent mini-EBV carrying minimal cis elements for latent replication and virus production. After exposure of human B lymphoma and lymphoblastoid cells to mini-EBVs transducing lacZ and human HPRT minigenes, stable cell transformants were selected which carried the delivered multimeric linear DNAs as circular episomes up to 160-180 kb in size. Following transduction of Lesch-Nyhan disease cells with a mini-EBV/HPRT, normal human HPRT function was restored in cells carrying large episomal HPRT minigenes. Direct visualization of the therapeutic mini-EBV by fluorescent in situ hybridization (FISH) on metaphase and interphase nuclei indicated that 99% (556/563) of the transduced mini-EBV DNA was episomal with an average copy number of one to two per nucleus. This system should allow the delivery of large genes in common diseases such as hemophilia A and codelivery of multiple genes in cells from polygenic diseases such as cancer. The extrachromosomal mini-EBV-based strategy offers an alternative to integrative or non-replicating gene therapy infectious vectors, which may be generally applicable to other herpesviruses characterized by different tropisms.
Предметные рубрики MeSH
Подготовка и перевод публикации
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Тип публикации указан по данным источника. Уровень доказательности автоматически не присваивается.