DOI 10.1038/s41598-024-73613-3
Роман представляет собой атермальный подход секвенирования генома для вируса обезьяны.
Аннотация
Вирус обезьяны (MPXV) — зоономический агент, ответственный за мпокс, часто самоограничивающийся оксотип. С мая 2022 года за пределами эндемических районов была обнаружена вспышка, характеризующаяся усилением передачи инфекции от человека к человеку. Целая последовательность генома (РГС) успешно использовалась для отслеживания вирусной эволюции во время вспышек или для наблюдения за несколькими патогенами, имеющими важное значение для здоровья населения. Нынешние протоколы WGS для MPXV основаны либо на метагеномической последовательности, либо на амплификации PCR. В то же время мутации или наличие различных клинков могут негативно влиять на урожайность генома. Здесь мы представляем создание нового изотермального метода WGS для MPXV, основанного на свойствах амплификации нескольких смещений (MDA) на основе ДНК Phi29 с использованием только 6 демпляторов. Этот подход позволил получить от 88% до 100% охвата геномомом с использованием либо щелочной денатурированной ДНК, либо клинического материала в качестве исходного материала с наивысшим охватом, создаваемым клиническим материалом. Мы демонстрируем, что этот роман является атермальным протоколом WGS, пригодным для мониторинга вирусной эволюции во время вспышек MPXV и наблюдения в любых обычных лабораторных условиях.
Название и аннотация на языке оригинала
A novel isothermal whole genome sequencing approach for Monkeypox Virus.
Monkeypox virus (MPXV) is the zoonotic agent responsible for mpox, an often-self-limiting pox-like disease. Since May 2022, an outbreak characterized by increased human-to-human transmission was detected outside the endemic regions. Whole genome sequencing (WGS) has been successfully used to keep track of viral evolution during outbreaks or for surveillance of multiple pathogens of public health significance. Current WGS protocols for MPXV are either based on metagenomic sequencing or tiled-PCR amplification. The latter allows multiplexing due to the efficient enrichment of the viral DNA, however, mutations or the presence of different clades can negatively influence genome coverage yield. Here, we present the establishment of a novel isothermal WGS method for MPXV based on Phi29 DNA polymerase-based multiple displacement amplification (MDA) properties making use of only 6 primers. This approach yielded from 88% up to 100% genome coverage using either alkaline denatured extracted DNA or clinical material as starting material, with the highest coverage generated by clinical material. We demonstrate that this novel isothermal WGS protocol is suitable for monitoring viral evolution during MPXV outbreaks and surveillance in any conventional laboratory setting.
Предметные рубрики MeSH
Подготовка и перевод публикации
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Тип публикации указан по данным источника. Уровень доказательности автоматически не присваивается.