MedElevator
Войти в исследования Проверка результатов анализа ПЦР в режиме реального времени для выявления и количественной оценки вирусных геномов нечеловеческой приматовой крови.
Аннотация
В 1980 году болезнь оспы была ликвидирована в природе, а вирус Вариолы, этиологический агент оспы, был ограничен двумя лабораториями: одна из них, расположенная в России (Москва), позднее переехала в VECTOR (Новосибирск, Сибирь) и одна в США (CDC Atlanta). Вскоре после успешного проведения кампании по искоренению этого заболевания вакцинация населения в целом прекратилась, что привело к тому, что население становится все более восприимчивым к иммунологии. В связи с возможностью преднамеренного восстановления вируса Вариолы и появлением других патогенных оксивирусов существует острая необходимость в разработке медицинских контрмер для лечения оксивирусных заболеваний. Очень вероятно, что США. Для утверждения этих мер регулирования УЛХ будет необходимо «обычное правило». В связи с этим соответствующие модели животных и связанные с ними вспомогательные оценки потребуют разработки, с тем чтобы они выдержали проверку с точки зрения регулирования.
МЕТОДЫ
исследователи Научно-исследовательского института инфекционных заболеваний армии Соединенных Штатов Америки (USAMRID) разработали оптимизированный анализ ПЦР в режиме реального времени для обнаружения ортопоксивирусов. Чтобы поддержать исследования животных, которые будут использоваться для одобрения медицинских контрмер США. УЛХ, анализ был разработан для квантитирования геномной ДНК оксвируса в нечеловеческой приматах (циномолгуса макака) в качестве измерения виремии. В этой рукописи описывается подтверждение процесса, включая извлечение ДНК из всей антикоагуляции крови с помощью ЭДТА, для получения и категоризации геномов обезьянопокс путем оценки точности, точности, стандартной кривой, специфичности, надежности и стабильности анализа и/или компонентов анализа.
Результаты
В ходе анализа был установлен нижний предел квантитации 50 копий генома 5/ проб uL, верхний предел квантитации 5 × 107 GC/5uL пробы и предел обнаружения 2,5 копий генома 5uL пробы. Анализ был специфичен для ортопоксивируса. Были обнаружены матричные эффекты, которые указывают на наличие ингибитора (ингибаторов) PCR, который (которые) был вытяген(ы) с ДНК-объектом.
ВЫВОДЫ
Анализ был подтвержден с целью количественного определения вирусной нагрузки обезьянопокса в крови из циномольгуса макака. Этот анализ подтвердил и будет по-прежнему содействовать представлению в УЛХ заявок на утверждение антивирусных препаратов для лечения оспы.
Название и аннотация на языке оригинала
Validation of a pan-orthopox real-time PCR assay for the detection and quantification of viral genomes from nonhuman primate blood.
BACKGROUND
In 1980, smallpox disease was eradicated from nature and Variola virus, the etiological agent of smallpox, was confined to two laboratories, one located in Russia (Moscow) later moved to VECTOR (Novosibirsk, Siberia) and one in the United States (CDC Atlanta). Vaccinations among the general public ceased shortly after the successful eradication campaign, resulting in an increasingly immunologically susceptible population. Because of the possibility of intentional reintroduction of Variola virus and the emergence of other pathogenic poxviruses, there is a great need for the development of medical countermeasures to treat poxvirus disease. It is highly likely that the U.S. FDA "animal rule" will be necessary for regulatory approval of these interventions. Therefore, relevant animal models and the associated supporting assays will require development to stand up to regulatory scrutiny.
METHODS
An optimized real time PCR assay for the detection of orthopoxviruses has been developed by researchers at the United States Army Research Institute of Infectious Diseases (USAMRIID). To support animal studies that will be used to support approval of medical countermeasures by the U.S. FDA, the assay was designed to quantitate poxvirus genomic DNA in a nonhuman primate (cynomolgus macaque) blood matrix as a measurement of viremia. This manuscript describes the validation of the process, including DNA extraction from whole blood anticoagulated with EDTA, for obtaining and quantitating monkeypox genomes by evaluating precision, accuracy, the standard curve, specificity, robustness and stability of the assay and/or components of the assay.
RESULTS
The assay had a lower limit of quantitation of 50 genome copies/5 uL sample, upper limit of quantitation of 5 × 107 GC/5uL sample and a limit of detection of 2.5 genome copies /5uL sample. The assay was specific for orthopoxvirus. Matrix effects were detected and suggest the presence of PCR inhibitor(s) that was co-extracted with the target DNA.
CONCLUSIONS
The assay has been validated for the purpose of quantitating monkeypox viral load in blood from cynomolgus macaques. This assay has and will continue to support submissions to the FDA for approval of antiviral therapeutics for smallpox.
Предметные рубрики MeSH
Подготовка и перевод публикации
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Тип публикации указан по данным источника. Уровень доказательности автоматически не присваивается.