Применение усовершенствованного DdPCR для надежной количественной оценки MPXV в клинических условиях.

Вирус обезьяны (МПXV) представляет собой глобальную угрозу для здоровья людей. Цифровой ПЦР (ddPCR) обладает потенциалом в качестве точного диагностического инструмента для клинической микробиологии. Вместе с тем имеется ограниченная литература о применимости ДДПКВ в клинических условиях. В этом исследовании были проанализированы клинические характеристики пациентов с MPXV во время первоначальной вспышки в Китае в июне 2023 года, и был разработан оптимизированный метод DdPCR с удалением разбавления и/или ингибитора для повышения эффективности обнаружения MPXV. Восемьдесят два образца MPXV были испытаны на девяти различных типах клинических образцов, включая фекалии, мочу, мазки гарнира, анальные мазки, слюну, жидкость герпеса, корку и сперму, и была произведена количественная оценка вирусной нагрузки каждого образца. С помощью qPCR был проведен сравнительный анализ для оценки чувствительности и специфичности и изучения характеристик инфекции MPXV путем анализа вирусных нагрузок в различных клинических образцах. Вследствие этого у пациентов с MPXV наблюдались общие симптомы харингеи и желудочно-кишечного кишечника. Оптимизированный метод DdPCR продемонстрировал относительно высокую чувствительность к количественной оценке MPXV в клинических материалах с пределом обнаружения 0,1 копий/мл. Это особенно заметно в образцах с низкой концентрацией, таких как целая кровь, сперма и моча. Оптимизированный ДдПХР продемонстрировал более высокую точность обнаружения по сравнению с обычными ДдПХР и qPCR, при этом площадь под кривой (AUC) составляла 0,939. За исключением проб корок, вирусные нагрузки в образцах постепенно снижались по мере распространения болезни. Уровни вируса в фекалиях и анальных мазках сохраняли высокий коэффициент обнаружения на каждой стадии постсимптомной стадии, и пробы фекалий и анальных мазков могут быть пригодными для клинической диагностики и непрерывного мониторинга MPXV.ВАЖНОСТЬ: Метод DdPCR оказался чувствительным и ценным инструментом точной количественной оценки вирусных нагрузок MPXV в различных типах клинических образцов. Полученные результаты позволили получить ценную информацию о необходимых протоколах предварительной обработки для диагностики MPXV при обнаружении DdPCR и о потенциально подходящих типах проб для сбора. Таким образом, такие результаты могут помочь в понимании потенциальных характеристик инфекции MPXV и использования DdPCR в клинических условиях.