MedElevator
Войти в исследования DOI 10.1007/s12250-020-00198-2
Создание инфекционного клона и одноразовых инфекционных частиц для коксакевируса А10.
Аннотация
Coxsackievirus A10 (CVA10) — один из основных этиологических факторов, связанных с болезнью рук, ног и ротовой полости. Нет вакцины и противовирусных препаратов для борьбы с инфекцией CVA10. Реверсивные генетические инструменты для CVA10 будут способствовать его механистическим исследованиям и разработке вакцин и противовирусных препаратов. Здесь были построены два инфекционных клона для прототипа и Myc-taged CVA10. Значимые вирусы CVA10 были собраны путем переноса вируса mRNA в клетки человека rabdomyosarcoma (RD). Спасённый CVA10 был дополнительно подтвержден последовательностью следующего поколения и характеризуется экспериментальной характеристикой. Мы также построили векторы субгеномного репликона CVA10 с люциферазным репортером и вирусным капсидом с репортером EGPF, соответственно. Благодаря совместному трансплантации вирусного репликона РНК и экспрессионного экспрессионного устройства в клетках эмбриональных почек человека 293Т (HEK293T) были получены единичные круглые инфекционные частицы (SRIP). На основе CVA10, репликонной RNA, были созданы SRIP с либо энтеровирусом A71 (EVA71), либо капсидом CVA10. Заражение ERA71 SRIP потребовало SCARB2, в то время как CVA10 SRIP - нет. И наконец, мы продемонстрировали значительное улучшение репликоновой деятельности и производства СИИИП за счет включения резиновой рипозимой молотка (HHRIb) до 5-футового региона (UTR). Таким образом, были успешно внедрены генетические инструменты обратного действия для прототипного штамма CVA10, включая как инфекционные клоны, так и систему SIP. Эти инструменты будут способствовать базовому и письменному исследованию CVA10.
Название и аннотация на языке оригинала
The Establishment of Infectious Clone and Single Round Infectious Particles for Coxsackievirus A10.
Coxsackievirus A10 (CVA10) is one of the major etiological agents of hand, foot, and mouth disease. There are no vaccine and antiviral drugs for controlling CVA10 infection. Reverse genetic tools for CVA10 will benefit its mechanistic study and development of vaccines and antivirals. Here, two infectious clones for the prototype and a Myc-tagged CVA10 were constructed. Viable CVA10 viruses were harvested by transfecting the viral mRNA into human rhabdomyosarcoma (RD) cells. Rescued CVA10 was further confirmed by next generation sequencing and characterized experimentally. We also constructed the vectors for CVA10 subgenomic replicon with luciferase reporter and viral capsid with EGFP reporter, respectively. Co-transfection of the viral replicon RNA and capsid expresser in human embryonic kidney 293T (HEK293T) cells led to the production of single round infectious particles (SRIPs). Based on CVA10 replicon RNA, SRIPs with either the enterovirus A71 (EVA71) capsid or the CVA10 capsid were generated. Infection by EVA71 SRIPs required SCARB2, while CVA10 SRIPs did not. Finally, we showed great improvement of the replicon activity and SRIPs production by insertion of a cis-active hammerhead ribozyme (HHRib) before the 5'-untranslated region (UTR). In summary, reverse genetic tools for prototype strain of CVA10, including both the infectious clone and the SRIPs system, were successfully established. These tools will facilitate the basic and translational study of CVA10.
Предметные рубрики MeSH
Подготовка и перевод публикации
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Тип публикации указан по данным источника. Уровень доказательности автоматически не присваивается.