MedElevator
Войти в исследования DOI 10.1016/j.jviromet.2023.114852
Очищение белка, содержащего вирус гепатита С, в неотравляющем состоянии.
Аннотация
Вирус гепатита С (ГХВ) является основной причиной хронического гепатита и гепатоклеточной карциномы. Среди его структурных белков белок HCV был связан с болезнью печени. Понимание роли основных белков ВЦВ в вирусных болезнях имеет решающее значение для разъяснения механизмов распространения заболеваний и выявления потенциальных целей в области наркотиков. Однако трудности с очисткой препятствуют всестороннему выяснению структуры и биохимических свойств основных белков HCV. В этом исследовании мы успешно растворили бактериально выраженный белок с высоким содержанием соляного и детергентного буфера и обошлись в процессе переливания денатурации. Хроматография, связанная с эксклюзивным исходом, выявила три отдельных пика в лизате клеток, инфицированных ВКВ, при этом бактериально выраженный растворимый белок, соответствующий его второму пику. Используя сочетание аффекта, исключения размеров и методов мультимодальной хроматографии, мы достигли чистоты > 95% для основного белка. Аналитическая ультрацентрация выявила мономерное образование в растворе. Спектроскопия дихроза дихроза УФ-излучения выявила 25,53% альфа-пелен и 20,26% бета-покрытий. Эти выводы в значительной степени свидетельствуют о том, что очищенные белки оставляли одну из местных структур, наблюдаемых в инфицированных ВКВ клетках.
Название и аннотация на языке оригинала
Purification of hepatitis C virus core protein in non-denaturing condition.
Hepatitis C virus (HCV) is the major cause of chronic hepatitis and hepatocellular carcinoma. Among its structural proteins, the HCV core protein has been implicated in liver disease. Understanding the role of HCV core proteins in viral diseases is crucial to elucidating disease mechanisms and identifying potential drug targets. However, purification challenges hinder the comprehensive elucidation of the structure and biochemical properties of HCV core proteins. In this study, we successfully solubilized bacterially expressed core protein using a high-salt and detergent-containing buffer and bypassed the denaturing-refolding process. Size-exclusion chromatography revealed three distinct peaks in the HCV-infected cell lysate, with the bacterially expressed soluble core protein corresponding to its second peak. Using a combination of affinity, size exclusion, and multi-modal chromatography purification techniques, we achieved a purity of > 95% for the core protein. Analytical ultracentrifugation revealed monomer formation in the solution. Far UV Circular dichroism spectroscopy identified 25.53% alpha helices and 20.26% beta sheets. These findings strongly suggest that the purified core proteins retained one of the native structures observed in HCV-infected cells.
Предметные рубрики MeSH
Подготовка и перевод публикации
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Тип публикации указан по данным источника. Уровень доказательности автоматически не присваивается.