Analytical biochemistry · 2008
Cryptic splice site in the complementary DNA of glucocerebrosidase causes inefficient expression.
СтатьяПоддержка исследования: вне правительства СШАНазвание и аннотация: Перевод пока не подготовлен
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Загрузка состояния…
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Bukovac Scott W, Bagshaw Richard D, Rigat Brigitte A, Callahan John W, Clarke Joe T R, Mahuran Don J
Аннотация
The low levels of human lysosomal glucocerebrosidase activity expressed in transiently transfected Chinese hamster ovary (CHO) cells were investigated. Reverse transcription PCR (RT-PCR) demonstrated that a significant portion of the transcribed RNA was misspliced owing to the presence of a cryptic splice site in the complementary DNA (cDNA). Missplicing results in the deletion of 179 bp of coding sequence and a premature stop codon. A repaired cDNA was constructed abolishing the splice site without changing the amino acid sequence. The level of glucocerebrosidase expression was increased sixfold. These data demonstrate that for maximum expression of any cDNA construct, the transcription products should be examined.