STAR protocols · 2022
FACS-assisted CRISPR-Cas9 genome editing of human induced pluripotent stem cells.
СтатьяПоддержка исследования: вне правительства СШАНазвание и аннотация: Перевод пока не подготовлен
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Загрузка состояния…
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Caillaud Amandine, Lévêque Antoine, Thédrez Aurélie, Girardeau Aurore, Canac Robin, Bray Lise, Baudic Manon, Barc Julien, Gaborit Nathalie, Lamirault Guillaume, Gardie Betty, Idriss Salam, Rimbert Antoine, Le May Cédric, Cariou Bertrand, Si-Tayeb Karim
Аннотация
This manuscript proposes an efficient and reproducible protocol for the generation of genetically modified human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) by genome editing using CRISPR-Cas9 technology. Here, we describe the experimental strategy for generating knockout (KO) and knockin (KI) clonal populations of hiPSCs using single-cell sorting by flow cytometry. We efficiently achieved up to 15 kb deletions, molecular tag insertions, and single-nucleotide editing in hiPSCs. We emphasize the efficacy of this approach in terms of cell culture time. For complete details on the use and execution of this protocol, please refer to Canac et al. (2022) and Bray et al. (2022).