Chikungunya virus (CHIKV) is a human pathogenic, mosquito-borne virus (arbovirus), which is causing epidemic outbreaks among human populations in Africa, Asia, Europe, and South- and Central America including the Caribbean. The development of novel approaches to prevent mosquito transmission of the virus in the field requires a detailed study of CHIKV interactions with its mosquito vectors in the laboratory. In this chapter, we describe how to prepare Aedes aegypti mosquitoes for the infection with freshly cultivated CHIKV. We also describe quantitative and qualitative viral detection assays i
СтатьяПоиск полного текста в очередиПеревод в очереди
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Загрузка состояния…
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Nanopore sequencing is transforming viral genomics through real-time, portable, long-read analysis of RNA and DNA. Unlike traditional short-read platforms, it detects nucleotide sequences by measuring ionic current changes as nucleic acids pass through nanoscale pores, enabling direct single-molecule sequencing and base modification detection. Its simplicity, flexibility, and capacity for ultra-long reads make it ideal for resolving complex genomic regions, structural variants, and full viral genomes. These advantages have accelerated its use in pathogen surveillance and outbreak response, esp
СтатьяПоиск полного текста в очередиПеревод в очереди
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Загрузка состояния…
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
The intestinal epithelium consists of a single layer of polarized cells that serves as a crucial barrier against pathogens while mediating food digestion and nutrient absorption. The differentiated villus cells, important for the intestine's function, originate from rapidly dividing Lgr5+ stem cells located in the intestinal crypts. These stem cells can be expanded in vitro and form three-dimensional (3D) "mini-organs" known as intestinal organoids, which closely phenocopy the intestinal epithelium. The development and maintenance of these 3D organoids depend on a defined growth factor cocktai
СтатьяПоиск полного текста в очередиПеревод в очереди
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Загрузка состояния…
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
In this chapter, we present a protocol for isolating fetal epithelial progenitors from the murine small intestine and colon, and for culturing them ex vivo using the three-dimensional organoid system. We also describe cellular approaches to characterize Lgr5-negative fetal progenitors and compare their identity and differentiation potential to those of Lgr5-positive adult intestinal stem cells. This system provides a valuable tool for studying the biology of fetal progenitors and exploring the developmental origins of adult intestinal stem cells.
СтатьяПоиск полного текста в очередиПеревод в очереди
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Загрузка состояния…
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Two-dimensional (2D) culture systems are powerful in vitro tools that have revolutionized the study of intestinal stem cell biology. These culture systems derived from mouse intestinal and colonic epithelia enable the modeling of tissue architecture, barrier function, and disease mechanisms under physiologically relevant conditions. This protocol details methods for isolating and maintaining mouse intestinal crypts as 2D monolayers. Monolayers are established via enzymatic dissociation and seeding onto ECM-functionalized hydrogels. This protocol also describes a deep learning pipeline that per
СтатьяПоиск полного текста в очередиПеревод в очереди
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Загрузка состояния…
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
The intestinal epithelium maintains continuous self-renewal and multi-differentiation capacities through the integrated regulation of multiple signaling pathways, including Wnt, bone morphogenetic protein, epidermal growth factor (EGF), and Notch signaling pathways. Based on this principle, a defined combination of EGF, Noggin, and the Wnt agonist R-spondin has been shown to support long-term expansion of mouse intestinal stem cells and the formation of organoids with indefinite self-renewal and full differentiation capacity. In human intestinal organoid cultures, the addition of small molecul
СтатьяПоиск полного текста в очередиПеревод в очереди
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Загрузка состояния…
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Genetic manipulation of cells represents one of the fundamental techniques in current biological research, essential for elucidating the regulatory mechanisms underlying various biological phenomena, modeling many diseases, and investigating their therapeutic interventions. However, in the context of organoid biology, the manipulation of target genes and the selection of resultant genetically modified clones often encounter significant technical challenges due to the typically low gene introduction efficiency. This difficulty is largely attributed to the three-dimensional culture of organoids
СтатьяПоиск полного текста в очередиПеревод в очереди
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Загрузка состояния…
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
The small intestine plays a crucial role in nutrient uptake and metabolism regulation while maintaining a barrier that protects against the harsh environment of the lumen. These different tasks are carried out by a multitude of cell types, continuously generated by the resident stem cell population, and whose specification is under tight regulatory control. Organoids are self-organizing 3D structures derived from tissue-resident stem cells, which retain the ability to differentiate into all other epithelial lineages. Protocols to enrich for the various cell subtypes in the intestine have great
СтатьяПоиск полного текста в очередиПеревод в очереди
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Загрузка состояния…
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Proteomics, the large-scale study of proteins, enables the identification, quantification, and functional characterization of proteins, revealing post-translational modifications and protein interactions that are not apparent from transcriptomic data. Human organoids, which recapitulate the structural and functional complexity of native epithelial tissues, provide powerful tools to study disease mechanisms and personalize therapies. However, their culture poses challenges for efficient protein extraction and reproducible analysis. Here, we present a proteomics workflow optimized to maximize pr
СтатьяПоиск полного текста в очередиПеревод в очереди
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Загрузка состояния…
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
The study of intestinal stem cells is crucial for developing therapies for gut regeneration. Using Tet-Op histone 2 B (H2B)-green fluorescent protein (GFP) fusion protein transgenic mouse, we have developed a three-dimensional small intestinal (SI) organoid culture model in which cells with different cell cycle durations can be distinguished, allowing real-time visualization of the kinetics of slow-cycling H2B-GFP-retaining putative SI epithelial stem cells. The model allows real-time monitoring of the behavior of H2B-GFP-retaining putative SI stem cells under basal conditions, of their respon
СтатьяПоиск полного текста в очередиПеревод в очереди
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Загрузка состояния…
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Derived from adult intestinal stem cells, organoids form intricate three-dimensional structures that closely mimic the cellular diversity and spatial organization of the human gut epithelium. Patient-derived organoids (PDOs) can recapitulate patient-specific tumor heterogeneity, making them highly valuable for colorectal cancer research and personalized medicine. However, their long-term in vitro culture still depends mainly on animal-derived materials (e.g., Matrigel) with undefined composition, batch variability, and limited tunability. To overcome these limitations, we introduced the use of
СтатьяПоиск полного текста в очередиПеревод в очереди
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Загрузка состояния…
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Apical-basal polarity is essential for gastrointestinal epithelium function, where the apical membrane mediates nutrient absorption, host-microbiota interactions, and pathogen defense. However, conventional intestinal organoid culture displays an "apical-in" topology, limiting functional research with respect to the apical membrane. F-actin labeling with fluorescent phalloidin, a well-established apical marker, is also incompatible with live imaging. To address these limitations, in this chapter we describe an extracellular matrix (ECM) removal protocol to achieve "apical-out" topology in porc
СтатьяПоиск полного текста в очередиПеревод в очереди
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Загрузка состояния…
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Intestinal stem cell (ISC)-derived organoids provide a physiologically relevant 3D culture system to model intestinal biology, regeneration, and disease mechanisms. Their complex architecture, recapitulating crypt structures, poses challenges for downstream histological and immunohistochemical analyses, necessitating optimized processing, and staining protocols. Here, we describe robust workflows for the fixation, embedding, sectioning, and staining of ISC-derived organoids. Each method is detailed stepwise, with emphasis on preserving morphology and antigenicity. We discuss reagent choices, c
СтатьяПоиск полного текста в очередиПеревод в очереди
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Загрузка состояния…
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Here, we present an optimized whole-organoid immunofluorescence staining protocol that preserves morphology, achieves uniform antibody penetration, and enables deep-tissue imaging without the need for tissue clearing. Organoids are three-dimensional, self-organizing structures that replicate many of the cellular and architectural features of their tissue of origin, making them powerful preclinical models for studying development, disease, and therapeutic responses. Most organoid research is performed on formalin-fixed, paraffin-embedded (FFPE) samples, in which organoids are sectioned across t
СтатьяПоиск полного текста в очередиПеревод в очереди
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Загрузка состояния…
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Understanding Chlamydia trachomatis infection requires physiologically relevant models tailored to various research questions. One of the main sites of C. trachomatis infection is the columnar epithelium of the endocervix; therefore, a model that accurately mimics the environment of endocervical epithelium is essential. Polarized cell models provide a valuable solution, offering a cost-effective yet biologically relevant alternative to conventional 2D culture systems and more complex and costly 3D or animal models. Immortalized human endocervical epithelial cells (A2EN cells) form a polarized
СтатьяПоиск полного текста в очередиПеревод в очереди
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Загрузка состояния…
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Chlamydia trachomatis is an obligate intracellular bacterium that infects the columnar epithelium of the human endocervix. While conventional two-dimensional cell cultures and animal models have been instrumental in advancing our understanding of C. trachomatis biology, they are limited in capturing the multicellularity, architecture, and physiological microenvironment of the human cervix. This chapter describes the use of a three-dimensional (3D) microphysiologic model to study Chlamydia trachomatis infection. The model is inexpensively made without specialized equipment and is designed to re
СтатьяПоиск полного текста в очередиПеревод в очереди
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Загрузка состояния…
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Identification and characterization of essential Chlamydia-specific factors are vital for the generation of effective therapeutics and vaccines. Despite delays in the development of genetic tools for Chlamydia, significant advancements in Chlamydia genetic manipulation have been made over the last decade and a half, now allowing for the targeted interruption or deletion of chromosomal genes. However, because of the obligate intracellular nature of the bacteria and its unique biphasic developmental cycle, it remains challenging to inactivate essential genes and study the function of their encod
СтатьяПоиск полного текста в очередиПеревод в очереди
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Загрузка состояния…
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Extracellular vesicles (EVs), particles released from cells, have the potential to become an important in vivo delivery vehicle for CRISPR machinery. Unlike viral vectors such as Adeno-associated virus (AAV), EVs reduce risks associated with immunogenicity, long-term expression, and potential off-target effects. EVs can efficiently deliver CRISPR/Cas9 ribonucleoprotein (RNP) complexes, which provide transient, ready-to-function editing machinery with reduced off-target risk compared with plasmid DNA or mRNA delivery. RNP loading into EVs can occur without specific targeting signals, although s
СтатьяПоиск полного текста в очередиПеревод в очереди
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Загрузка состояния…
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
BACKGROUND: Globally in 2024, only 54% of people diagnosed with tuberculosis received an initial WHO-recommended rapid molecular diagnostic test. Pooled testing could expand access to molecular detection using existing laboratory capacity. We aimed to evaluate the performance of pooled tuberculosis testing in a multicentre diagnostic accuracy study.
METHODS: In this prospective diagnostic accuracy study, we enrolled individuals with presumptive tuberculosis through facility-based case finding (district hospitals and primary health centres) and community-based case finding in Bangladesh, Brazi
СтатьяПоиск полного текста в очередиПеревод в очереди
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Загрузка состояния…
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Organoids and fibroblasts derived from patient tissue serve as physiologically meaningful in vitro models to investigate tissue biology, diseases, and treatment responses. In this study, we present a robust protocol for the simultaneous isolation and long-term culture of patient-derived organoids (PDOs) and fibroblasts from both healthy and colorectal cancer samples. The workflow uses enzymatic dissociation followed by efficient separation into epithelial and stromal cell fractions. Organoids are embedded in Matrigel or Matrigel-Collagen I mixtures to support three-dimensional growth, whereas
СтатьяПоиск полного текста в очередиПеревод в очереди
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Загрузка состояния…
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.