Высокоэффективная маркировка нервно-паралитических волокон в очищенных тканях для легкой микроскопии.

СВЕДЕНИЕ: Методы расчистки тканей в сочетании с микроскопией люминесцентных материалов (LSFM) позволяют производить съемку биологических структур с высоким разрешением 3D без физического отделения. Хотя они широко используются в нейробиологии для определения архитектуры мозга и коннектомики, их применение для картирования спинного мозга остается более ограниченным, что создает проблемы для изучения демиелинизирующих заболеваний, таких, как множественный склероз. Визуализация " миелин " в очищенных тканях особенно затруднена из-за того, что большинство протоколов удаления липидов являются липидными, а альтернативные методы иммунной маркировки не дали удовлетворительных результатов.Чтобы преодолеть эти ограничения, мы разработали новый протокол под названием HEFF - Высокоэффективная маркировка либер, в котором используется флуоресцентно помеченный аминостерол, тродускемин, который демонстрирует сильную привязанность к богатым холестерином мембранам, а также дополнительный раунд фиксации с глютаральдегидом. РЕЗУЛЬТАТЫ И СОПОСТАВЛЕНИЕ С СУЩЕСТВУЮЩИМИ МЕТОДАМИ: Маркировка тродикомина была испытана в сочетании с различными установленными методами очистки тканей и по сравнению с HEFF, что позволило найти наилучший подход к обеспечению высокой яркости миелина в спинном мозге и мозге мыши, а также в образцах головного мозга человека. Наконец, мы продемонстрировали, что HEFF можно использовать для пятна и изображения с помощью LSFM целого очищенного спинного мозга мыши. ВЫВОДЫ: Наши данные подтверждают возможность использования HEFF в сочетании с LSFM в качестве практического инструмента для оценки новых методов лечения для ремии в доклинических моделях заболеваний CNS.