MedElevator
Войти в исследования Обнаружение геномных последовательности вируса кори в мозговой ткани SSPE по цепной реакции полимеразы.
Аннотация
В качестве предварительного шага была изменена цепная реакция полимеразы (PCR) для обнаружения геномных последовательностей RNA путем создания копий этих последовательностей CDNA. Были синтезированы пары олигонуклеотидов, дополняющие последовательности в каждом из пяти основных структурных генов белка вируса кори (белок нуклеокапсид, фосфопротеин, матрицовый протеин, белок синтеза и протеин гемагглютинина). Продукты ПЦР были в предварительном порядке идентифицированы путем визуализации полос соответствующего размера путем пятнаэтидиумного метила после геля электрофореза, и их идентичность была подтверждена последующим ограничением фермента декольте продуктов на заранее определенных участках для получения фрагментов прогнозируемого размера. Благодаря этому методу из каждого из этих пяти генов были успешно расширены 400-500 базисных регионов в экстрактах вируса дикой кори, выращенных в клетках Vero, и в РНК, взятых из большинства тестированных тканей мозга SSPE, но не в РНК из каких-либо контрольных тканей мозга. Геном кори был обнаружен в мозговых тканях SSPE, хранившихся в течение 27 лет, и формализованных тканях головного мозга в виде подкожного склероза (SSPE) в возрасте 9 лет. Этот метод обеспечивает простые, быстрые и высокочувствительные средства обнаружения и идентификации последовательности геномов РНК с помощью ПЦР. Успех этого метода обнаружения вируса кори в мозговой ткани SSPE свидетельствует о том, что ПЦР подходит для изучения возможного присутствия вирусов РНК в других неврологических расстройствах неизвестной этиологии.
Название и аннотация на языке оригинала
Detection of measles virus genomic sequences in SSPE brain tissue by the polymerase chain reaction.
The polymerase chain reaction (PCR) was modified to detect RNA genomic sequences by generating cDNA copies of these sequences as a preliminary step. Oligonucleotide primer pairs complementary to sequences in each of the five major structural protein genes of the measles virus (nucleocapsid protein, phosphoprotein, matrix protein, fusion protein, and hemagglutinin protein) were synthesized. PCR products were tentatively identified by visualization of bands of the appropriate size by ethidium bromide staining after gel electrophoresis, and identity was confirmed by subsequent restriction enzyme cleavage of the products at predetermined sites to yield fragments of predicted size. This method successfully amplified 400-500 base regions from each of these five genes in RNA extracts of wild measles virus cultured in Vero cells and in RNA extracted from most of the SSPE brain tissues tested, but not in RNA from any control brain tissues. Measles virus genome was detected in SSPE brain tissues stored frozen for as long as 27 years and formalin-fixed paraffin-embedded subacute sclerosing panencephalitis (SSPE) brain tissues as old as 9 years. This method provides a simple, rapid and highly sensitive means of detecting and identifying sequences of RNA genomes by PCR. The success of this method in detecting measles virus in SSPE brain tissue suggests that PCR is appropriate to investigate the possible presence of RNA viruses in other neurological disorders of unknown etiology.
Предметные рубрики MeSH
Подготовка и перевод публикации
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Тип публикации указан по данным источника. Уровень доказательности автоматически не присваивается.