Выяснить оптимальные сроки дублирования для стабильности репортеров.

Флавивирусы, передающиеся с помощью москито, вызывают широко распространенные болезни во всем мире. В целях обеспечения более совершенных молекулярных инструментов для изучения лекарственных экранов и патогенеза мы сообщаем о новом подходе к производству стабильных флавивирусов, пропитанных нанолуком, включая серотипы денге 1-4, японский энцефалит, вирус желтой лихорадки, вирус Западного Нила и вирус Зика. Поскольку ген репортера часто проектируется в генной области Капсида, последовательность капсида должна быть дублирована для фланга гена репортера; такое копирование капсида имеет важное значение для вирусного воспроизведения. Традиционный подход к стабилизации репортеров флавивирусов заключался в сокращении или изменении повторяемой последовательности капсидов для сведения к минимуму гомологической рекомбинации. Ни в одном из исследований не рассматривалось влияние дублирования усилий капсида на устойчивость репортера к вирусу. Здесь мы сообщаем об оптимальной длине для стабилизации репортёрских флавивирусов. Эти вирусы были стабильными после десяти раундов пассивирования клеточной культуры, а в случае стабильного вируса НаноЛука, погруженного в зику (ZIKV C38), этот вирус реплицировался на 107 FFU/ml в клеточной культуре и произвел мощный сигнал люсиферазы после прививки комаров. Механистически оптимальная длина дублирования капсида может содержать все рекордные элементы РНК, необходимые для репликации вирусной РНК, что снижает давление отбора для рекомбинации. В совокупности эти данные описывают усовершенствованный метод построения оптимальных репортеров.