MedElevator
Войти в исследования Мутационный анализ нейтрализующего эпитопа на вирусе денге типа 2 (DEN2) белка: моноколональная антителостойкая DEN2/DEN4 chimeras демонстрирует снижение нейровинулентности мыши.
Аннотация
Антигеничная площадка вируса денге типа 2 (DEN2) нейтрализации моноклонных антител (mab) 3H5 была изучена путем мутации. Сопоставление последовательности показало, что большая часть 12-аминокислотной последовательности, простирающейся от позиции 386-397 конверта DEN2 glycoprotein (E), которая, как ранее считалось, представляет узел связи DEN2-mab 3H5, также присутствует в некоторых штаммах вируса типа 1, 3 или 4 денге. Однако район, занятый последовательностью Glu-Pro-Gly на верхних позициях 383-385, был полностью сохранен среди штаммов DEN2, но отличался от других серотипных вирусов, что предполагает, что эта последовательность может быть частью антигенного участка маб 3H5. Мы изучили эту возможность, воспользовавшись ранее построенным клоном химерика DEN2 (PreM-E)/DEN4 cDNA для производства жизнеспособных мутантов, имеющих последовательности DEN2 PreM и E, которые могут быть проанализированы на предмет привязки и нейтрализации с помощью Mab 3H5. Мы построили 13 таких мутантов DEN2, которые содержали единственную замену аминокислоты в регионе между позициями 383 и 393 DEN2 E. Каждая единственная замена в регионе, охватывающая позиции 386-393 DEN2, дала вирус, который был таким же реактивным с мабой 3H5, как и материнский химерик. Эти результаты согласуются с масштабами сохранения последовательности в регионе. В отличие от этого, 5 из 6 мутантов, получивших замену аминокислотой на позиции 383 384 или 385, не отреагировали на мачту 3H5, обнаруженную в ходе анализа иммунной флюоресценции, и не были нейтрализованы мафией. Интересно, что каждый из 5-кратных мутантов DEN2 также продемонстрировал пониженную нейровинулентность мыши по сравнению с родительским химериком DEN2, когда он был привит интрацербрально. Эти наблюдения свидетельствуют о том, что последовательность Glu-Pro-Gly на позициях 383-386 DEN2 E является компонентом участка, на который направлена маб (3H5). В недавно определенной трехмерной структуре соответствующего вируса энцефалита E, переносимого клещами, последовательность Glu-Pro-Gly будет расположена на боковой поверхности иммуноглобулина, который предлагается связывать с рецептором принимающей клетки.
Название и аннотация на языке оригинала
Mutational analysis of a neutralization epitope on the dengue type 2 virus (DEN2) envelope protein: monoclonal antibody resistant DEN2/DEN4 chimeras exhibit reduced mouse neurovirulence.
The antigenic site of dengue type 2 virus (DEN2)-neutralizing monoclonal antibody (mab) 3H5 was investigated by mutational analysis. Sequence comparisons indicated that much of the 12-amino-acid sequence extending from position 386 to 397 of the DEN2 envelope glycoprotein (E) previously thought to represent the DEN2-specific mab 3H5 binding site was also present in some dengue type 1, 3, or 4 virus strains. However, the region occupied by the Glu-Pro-Gly sequence at upstream positions 383 to 385 was completely conserved among DEN2 strains, but divergent in other serotype viruses, suggesting that this sequence might be part of the antigenic site of mab 3H5. We investigated this possibility by employing the previously constructed chimeric DEN2(PreM-E)/DEN4 cDNA clone to produce viable mutants bearing DEN2 PreM and E sequences that could be analyzed for binding to and neutralization by mab 3H5. We constructed 13 such DEN2 mutants that contained a single amino acid substitution in the region between positions 383 and 393 of DEN2 E. Each single substitution in the region spanning positions 386 through 393 of DEN2 yielded a virus that was as reactive with mab 3H5 as the parental chimeric virus. These results are consistent with the extent of sequence conservation in the region. In contrast, 5 of 6 mutants that sustained an amino acid substitution at position 383, 384, or 385 failed to react with mab 3H5 as detected by immunofluorescence assay and failed to be neutralized by the mab. Interestingly, each of the 5 mab-resistant DEN2 mutants also exhibited reduced mouse neurovirulence compared to parental chimeric DEN2 when inoculated intracerebrally. These observations suggest that the Glu-Pro-Gly sequence at positions 383-386 of the DEN2 E is a component of the site against which mab 3H5 is directed. In the recently determined three-dimensional structure of the related tick-borne encephalitis virus E, the Glu-Pro-Gly sequence would be located on the lateral surface of the immunoglobulin-like domain that is proposed to bind to the host cell receptor.
Предметные рубрики MeSH
Подготовка и перевод публикации
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Тип публикации указан по данным источника. Уровень доказательности автоматически не присваивается.