MedElevator
Войти в исследования Инженерные аденовирусы видов B и C, ранние, промежуточные и поздние вирусные гены.
Аннотация
В настоящее время разрабатываются аденовирусы (АДВ) для онколитической или прививочной терапии в связи с существующими и возникающими заболеваниями. Целесообразно использовать хорошо квалифицированные и квалифицированные приматы человека и человека, выражающие множество полезных нагрузок, однако их воспроизведение в моделях грызунов ограничено. Чтобы зафиксировать время аденовального генного выражения в клеточной культуре, мы разработали полностью ретрансляционные транскрипционные вирусы для HADV-C5, -B3, и -B35. Последовательность 2А, сделанная из пикорнавируса, которая вызывает совместное разделение и перезаключение пептида, была связана с GPF, и в нее были вставлены C-terminal раннего гена E1A, промежуточный ранний ген-белок IX и поздний волокнистый ген. Пептид 2А вызвал резиносомный пропуск во время перевода посыльного РНК (mRNA) и породил GPF от соответствующих вирусных пропагандистов, о чем свидетельствуют иммунобротирование и цитометрический анализ клеток человека и грызунов. В человеческих клетках оба вида B и C AdV демонстрировали самое высокое выражение репортёра волокна, за которым следовали белок IX и самый низкий для E1A. Прививка вирусами HADV-C5 или -B3/35, кодирующими белок IX- или волокна-GPF, привела к более высоким уровням GPF в хомячке, чем в мышиных клетках. Заметно, что, несмотря на довольно низкую 2А-реберосомную эффективность пропусков в размере Δ50% для E1A-2A-GPF, белка IX-2A-GPF и волокна-2A-GPF, необработанный протеин IX-2A-GFP и волокна-2A-GFP синтез протеинов были эффективно интегрированы в вирионы HADV-B3 соответственно. Эти данные свидетельствуют о том, что B3-C-termini белка IX и волокна могут рассматриваться для перенацеливания конструированных онколитических или прививочных векторов или для отображения антигенов. Для улучшения онколитических адВ векторов, выражающих терапевтические гены, могут использоваться переменные уровни экспрессии трансгенов различных субвирусных пропагандистов.
Название и аннотация на языке оригинала
Engineered Human Adenoviruses of Species B and C Report Early, Intermediate Early, and Late Viral Gene Expression.
Adenoviruses (AdVs) are being developed for oncolytic or vaccination therapy against existing and emerging conditions. Well-characterized replication-competent human and human primate AdVs expressing multiple payloads are desirable, but their replication in rodent models is limited. To score the timing of adenoviral gene expression in cell cultures, we developed fully replication-competent transcriptional reporter viruses for HAdV-C5, -B3, and -B35. The picornavirus-derived 2A sequence, which induces cotranslational peptide splitting and reinitiation (skipping), was linked to GFP and the fused sequence was inserted C-terminal of the early gene E1A, the intermediate early gene protein IX and the late fiber gene. The 2A peptide induced ribosomal skipping during translation of the messenger RNA (mRNA) and gave rise to GFP from the corresponding viral promoters, as shown by immunoblotting and flow cytometry analyses of human and rodent cells. In human cells, both species B and C AdV exhibited highest reporter expression for fiber, followed by protein IX and lowest for E1A. Inoculation with either HAdV-C5 or -B3/35 viruses encoding protein IX- or fiber-GFP gave rise to higher GFP levels in hamster than mouse cells. Remarkably, despite rather low 2A ribosomal skipping efficiency of ∼50% for E1A-2A-GFP, protein IX-2A-GFP, and fiber-2A-GFP, unprocessed protein IX-2A-GFP and fiber-2A-GFP fusion proteins were efficiently incorporated into HAdV-B3 virions, respectively. These data indicate that the B3 C-termini of protein IX and fiber can be considered for retargeting engineered oncolytic or vaccination vectors, or for antigen display. The variable expression levels of transgenes from different subviral promoters may be used to improve oncolytic AdV vectors expressing therapeutic genes.
Предметные рубрики MeSH
Подготовка и перевод публикации
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Тип публикации указан по данным источника. Уровень доказательности автоматически не присваивается.