MedElevator
Войти в исследования Аденовирус ВА РНК ухудшает созревание первичной микроРНК.
Аннотация
Аденовирус выражает две некодирующие РНК, связанные с вирусом (VA): VA I RNA и VA II RNA. Выраженные Аденовирусом ВА РНК вмешиваются в путь микроРНК (miRNA), конкурируя с прекурсорами миРНС. Структура обработки первичной miRNA (pri-minRNA) и факторы, влияющие на ее обработку, точно не известны при использовании аденовируса для доставки pri-miRNA.
МЕТОДЫ
Для наблюдения за обработкой pri-miRNA, плазмидная конструкция кодировки pri-miRNA была переведена совместно с VA I/II RNA экспрессией плазмида, или был создан и инфицирован рекомбинантный аденовирус шифрования pri-miRNA. Уровни miRNA, VA I RNA и VA II RNA были проанализированы количественным ПЦР в режиме реального времени (RT-PCR). VA I-II была проанализирована RNA полной длины RT-PCR. С антителом Дрошы был проведен анализ иммунной опреснения в целях выведения VA I-II с Drosha.
Результаты
pri-miRNA обычно обрабатывалась в зрелую миРНК, когда она выражалась в клетках с использованием плазмида. Однако зрелость miRNA была нарушена, когда pri-miRNA была доставлена и выражена с помощью аденовируса. Следует отметить, что процесс pri-miRNA был заблокирован по выражению VA RNA. Такая заблокированная обработка может быть найдена путем внедрения антисенсовой РНК ВА, анти-3'VA RNA. Кроме того, RNA VA были переквалифицированы в VA I-II, которая, как было установлено, связывает и секвестрирует Дрошу.
ВЫВОДЫ
Аденовирусная инфекция сводит на нет регулирование обработки примиРНК в клетках, и такое регулирование может быть получено из VA I-II полноразмерных РНК в форме pri-miRNA путем конкурентного присоединения к протеину Дроша. Эти результаты свидетельствуют о том, что для успешной доставки и выражения pri-miRNA или SRNA в клетках с использованием аденовируса следует препятствовать выражению аденов VA RNA.
Название и аннотация на языке оригинала
Adenovirus VA RNAs impair maturation of primary microRNA.
BACKGROUND
Adenovirus expresses two non-coding virus-associated (VA) RNAs: VA I RNA and VA II RNA. Adenovirus-expressed VA RNAs interfere with the microRNA (miRNA) pathway by competing with precursor miRNAs. The processing pattern of primary miRNA (pri-miRNA) and factors to affect its processing are not exactly known when using adenovirus for the delivery of pri-miRNA.
METHODS
To observe pri-miRNA processing, plasmid construct encoding pri-miRNA was co-transfected with VA I/II RNA expression plasmid, or recombinant adenovirus encoding pri-miRNA was generated and infected. Levels of miRNAs, VA I RNA and VA II RNA were analyzed by a quantitative real-time PCR (RT-PCR). VA I-II full-length RNA was analyzed by a RT-PCR. RNA immunoprecipitation analysis to pull-down the VA I-II full-length RNA binding with Drosha was conducted with Drosha antibody.
RESULTS
pri-miRNA was normally processed into mature miRNA when it was expressed in cells using plasmid. However, miRNA maturation was impaired when pri-miRNA was delivered and expressed using adenovirus. Of note, pri-miRNA processing was observed to be blocked by VA RNA expression. Such blocked processing could be recovered by introducing antisense RNA of VA RNA, anti-3'VA RNA. In addition, VA RNAs were transcribed into VA I-II full-length RNA, which was found to bind and sequester Drosha.
CONCLUSIONS
Adenovirus infection downregulated the processing of pri-miRNAs in cells, and such downregulation could be derived from VA I-II full-length RNAs in pri-miRNA-like form through competitively binding to Drosha protein. These results indicated that the expression of adenovirus VA RNAs should be inhibited for successful delivery and expression of pri-miRNA or shRNA in cells using adenovirus.
Предметные рубрики MeSH
Подготовка и перевод публикации
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Тип публикации указан по данным источника. Уровень доказательности автоматически не присваивается.