MedElevator
Войти в исследования Инженерная спящая красавица транспозон как эффективная система оптимизации производства шимпа Аденовира.
Аннотация
Спящая красавица (SB) — первый транспозон ДНК, используемый для эффективного транспонирования в позвоночных клетках, открывая новые приложения для генной инженерии и генной терапии. Система передачи генов на основе транспозона содержит благоприятные особенности невирусных векторов и привлекательный профиль безопасности. Здесь мы использовали SB для разработки клеток HEK293 для оптимизации производства шимпанзе Аденовектора (chAD), относящегося к человеческому мастаденовирусу C. На сегодняшний день переносчики chAD применяются в нескольких клинических условиях для инфекционных заболеваний, последний, но не в последнюю очередь COVID-19. Твердое, эффективное и быстрое производство вирусных векторов может способствовать клиническому применению переносчиков чад. Для этой цели мы сначала заменили гены hAD5 E1 на chAD-C E1 с помощью системы CRISPR/Cas9. Мы показали, что в отсутствие человека Ad5 E1, ген шимпанзе Ad-C E1 не поддерживал выживание HEK293. Чтобы улучшить производство переносчиков chAD-C, мы создали HEK293 клетки для устойчивого выражения белка-прекурсора chAD-C (ch.pTP), который играет ключевую роль в репликации ДНК шимпанзе Аденовира. Полученные результаты свидетельствуют о том, что экзогенное выражение ch.pTP значительно улучшило упаковку и амплификацию рекомбинированных векторов chAD-C, таким образом, модифицированные элементы HEK293ch.pTP могли бы представлять собой более совершенную линию упаковочных элементов для производства этих векторов.
Название и аннотация на языке оригинала
Engineered Sleeping Beauty Transposon as Efficient System to Optimize Chimp Adenoviral Production.
Sleeping Beauty (SB) is the first DNA transposon employed for efficient transposition in vertebrate cells, opening new applications for genetic engineering and gene therapies. A transposon-based gene delivery system holds the favourable features of non-viral vectors and an attractive safety profile. Here, we employed SB to engineer HEK293 cells for optimizing the production of a chimpanzee Adenovector (chAd) belonging to the Human Mastadenovirus C species. To date, chAd vectors are employed in several clinical settings for infectious diseases, last but not least COVID-19. A robust, efficient and quick viral vector production could advance the clinical application of chAd vectors. To this aim, we firstly swapped the hAd5 E1 with chAd-C E1 gene by using the CRISPR/Cas9 system. We demonstrated that in the absence of human Ad5 E1, chimp Ad-C E1 gene did not support HEK293 survival. To improve chAd-C vector production, we engineered HEK293 cells to stably express the chAd-C precursor terminal protein (ch.pTP), which plays a crucial role in chimpanzee Adenoviral DNA replication. The results indicate that exogenous ch.pTP expression significantly ameliorate the packaging and amplification of recombinant chAd-C vectors thus, the engineered HEK293ch.pTP cells could represent a superior packaging cell line for the production of these vectors.
Предметные рубрики MeSH
Подготовка и перевод публикации
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Тип публикации указан по данным источника. Уровень доказательности автоматически не присваивается.