Эффективное ингибирование раковых клеток рекомбинантным аденовирусом, выражающим искусственное микроRNA-нацеливание ЭГФР и обратно-каспаза-3.

Лечение рака, ориентированное на ЭГФР, обычно сталкивается с резистентностью к лекарственным препаратам, главным образом из-за мутации. Генотерапия с искусственным микроRNA, направленная на сохранение EGFR, может избежать такой проблемы. В этом исследовании мы создали рекомбинантный аденовир, выражающий искусственное микроRNA и активный RevCASP3 (AD-EC), под контролем пропагандиста SLPI по опухоли, и провели оценку его ингибиторного воздействия на раковые клетки HEP-2 как in vitro, так и in vivo. Результаты анализа MTT показали, что коэффициент ингибирования роста клеток на уровне 72 часов составил 44,0% в группе AD-EC на уровне MOI 50, в то время как этот показатель составлял 7,7% в группе AD-GPF и 3,6% в группе Cetuximab (500 мкг/мл), соответственно. Анализ цитометрии потока показал, что поздняя скорость апоптотических клеток составила 36,1 процента в группе AD-EC, что значительно превышает 6,5 процента в группе AD-GPF (p <0,001). Когда AD-EC (MOI 50) комбинировался с CDDP (0,25 мкг/мл), коэффициент запоздалых апоптотических клеток возрос до 61,2%, что значительно выше, чем в каждой группе монотерапий (P <0,001). Система XCELLigence в режиме реального времени зафиксировала эффективное сдерживание роста клеток в группах AD-EC и CDDP и более значительное воздействие в группе AD-EC плюс CDDP. Western blot показал, что AD-EC может помешать активации трассы AKT и ERK1/2, в то время как Cetuximab чрезмерно активировал трассу AKT. Эксперименты с HEP-2 xenograft в обнажённых мышах подтвердили ингибицию опухоли в AD-EC, CDDP и AD-EC плюс группы CDDP по сравнению с группой PBS (P < 0,01). В совокупности эти данные поддерживают эффективное подавление раковых клеток благодаря этой новой стратегии генной терапии.