MedElevator
Войти в исследования Аденовиральные векторы, обладающие высоким потенциалом, дают разрешение на бурную и верзольную проверку инструментов и стратегий ремонта генов DMD в человеческих клетках.
Аннотация
Duchenne Music Dystrophy (DMD) — мышечное расстройство, вызванное мутациями в гене DMD ~2.4 Mb Dystrophin. Направленные РНК PRISPR-Cas9 нуклеарные системы (RGN) открывают новые терапевтические маршруты DMD, к числу узких мест которых относится доставка значительных комплексов RGN для оценки их воздействия на геномы человека и испытания ex vivo и в vivo стратегий корректировки DMD. В данном случае были исследованы высокопроизводительные аденовальные векторы (HC-AdVs), кодирующие одиночные или двойные высокоспециализированные RGN с оптимизированными компонентами, на предмет постоянного ремонта неисправных аллелей DMD либо посредством экзона 51-целевого инделяционного образования, либо крупной мутной эксцизии (>500 кБ), соответственно. Во-первых, мы установили, что при высоких дозах HC-AdV третьего поколения без всех вирусных генов значительно меньше цитотоксичных, чем аденовальных векторов второго поколения, удаленных в E1 и E2A. Во-вторых, мы показываем, что генетические перенацеливаемые HC-ADV могут исправить до 42% ± 13% дефектных аллелей DMD в популяциях мышечных клеток путем целенаправленного удаления основных мутационных горячих точек, в которых находится более 60% крупных решетчатых решёток. Обе испытанные стратегии по ремонту генов DMD с легкостью привели к обнаружению дистрофинов, подобных Бекеру, в неотобранных мышечных клетках, что привело к восстановлению β-дистрогликана в плазме дифференцированных мышечных клеток. Таким образом, HC-AdV позволяет проводить эффективную оценку инструментов и стратегий БДМ в дистрофиновых и дефективных человеческих клетках, расширяя в то же время гамму корректирующих DMD агентов.
Название и аннотация на языке оригинала
High-Capacity Adenoviral Vectors Permit Robust and Versatile Testing of DMD Gene Repair Tools and Strategies in Human Cells.
Duchenne muscular dystrophy (DMD) is a fatal X-linked muscle wasting disorder arising from mutations in the ~2.4 Mb dystrophin-encoding DMD gene. RNA-guided CRISPR-Cas9 nucleases (RGNs) are opening new DMD therapeutic routes whose bottlenecks include delivering sizable RGN complexes for assessing their effects on human genomes and testing ex vivo and in vivo DMD-correcting strategies. Here, high-capacity adenoviral vectors (HC-AdVs) encoding single or dual high-specificity RGNs with optimized components were investigated for permanently repairing defective DMD alleles either through exon 51-targeted indel formation or major mutational hotspot excision (>500 kb), respectively. Firstly, we establish that, at high doses, third-generation HC-AdVs lacking all viral genes are significantly less cytotoxic than second-generation adenoviral vectors deleted in E1 and E2A. Secondly, we demonstrate that genetically retargeted HC-AdVs can correct up to 42% ± 13% of defective DMD alleles in muscle cell populations through targeted removal of the major mutational hotspot, in which over 60% of frame-shifting large deletions locate. Both DMD gene repair strategies tested readily led to the detection of Becker-like dystrophins in unselected muscle cell populations, leading to the restoration of β-dystroglycan at the plasmalemma of differentiated muscle cells. Hence, HC-AdVs permit the effective assessment of DMD gene-editing tools and strategies in dystrophin-defective human cells while broadening the gamut of DMD-correcting agents.
Предметные рубрики MeSH
Подготовка и перевод публикации
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Тип публикации указан по данным источника. Уровень доказательности автоматически не присваивается.