MedElevator
Войти в исследования Строительство рекомбинантных аденовирусных геномов путем прямого клонирования.
Аннотация
В этом протоколе описывается, как генерировать инфекционный вектор аденовируса путем прямой перевязки и клонирования. Это первый шаг в производстве рекомбинантного аденовирусного вектора. Протокол начинается с удобной и эффективной процедуры двойного отбора, основанной на противобиотической устойчивости и идентификации зеленых флуоресцентных белков (ГФП)-отрицательных бактериальных колоний. В этом протоколе прокариотическая кассета для GPF в шаттле Plasmid PSh-pkGPF заменяется трансгеном. Полученный в результате phuttle-transgene plasmide используется для клонирования трансгеновского экспресс-кассеты в pAD-pkGPF, используя ту же процедуру двойного отбора.
Название и аннотация на языке оригинала
Construction of Recombinant Adenovirus Genomes by Direct Cloning.
This protocol describes how to generate an infectious adenovirus vector by direct ligation and cloning. This is the first step in the production of a recombinant adenovirus vector. The protocol begins with a convenient and efficient double-selection procedure based on antibiotic resistance and identification of green fluorescent protein (GFP)-negative bacterial colonies. In this protocol, the prokaryotic expression cassette for GFP in the shuttle plasmid pSh-pkGFP is replaced with the transgene. The resulting pShuttle-transgene plasmid is then used to clone the transgene expression cassette into pAd-pkGFP, using the same double-selection procedure.
Предметные рубрики MeSH
Подготовка и перевод публикации
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Тип публикации указан по данным источника. Уровень доказательности автоматически не присваивается.