MedElevator
Войти в исследования DOI 10.1590/s0001-37652013005000008
Сооружение подгеномных репликонов желтой лихорадки с помощью метода гомологической рекомбинации дрожжей.
Аннотация
Репликон РНК, полученный из генома Флавивируса, является ценным инструментом для изучения вирусного репликации независимо от вирионной сборки и созревания, не говоря уже о большом потенциале для гетерологического генного выражения. В этом исследовании мы описали создание субгеномных репликонов вируса желтой лихорадки с помощью метода рекомбинации на дрожжевой основе. Плазмид с жёлтой лихорадкой 17D репликон штамма (pBSC-repYFV-17D), который ранее характеризовался, был обработан гетерологичным выражением генов зеленого флуоресцентного белка (repYFV-17D-GFP) и светлячка люциферазы (repYFV-17D-Luc). Оба репликона были построены путем гомологической рекомбинации между линейным вектором pBSC-repYFV-17D и продуктом PCR, содержащим гомологические 25 кончиков нуклеотидов, встроенными в PCR. Геномическая организация этих конструкций похожа на репиФВ-17D, но с включением ген репортера между оставшимися 63 N-терминальными нуклеотидами белка капсида и 72 C-терминальными нуклеотидами белка Е. Репликоны репликонов RepYFV-17D-GPF и repYFV-17D-Luc показали эффективное воспроизведение и выражение генов репортеров. Технология рекомбинации на дрожжевой основе, использованная в этом исследовании, оказалась применимой для манипулирования геномомом вируса желтой лихорадки в целях построения субгеномических репликонов.
Название и аннотация на языке оригинала
Construction of yellow fever virus subgenomic replicons by yeast-based homologous recombination cloning technique.
RNA replicon derived from Flavivirus genome is a valuable tool for studying viral replication independent of virion assembly and maturation, besides being a great potential for heterologous gene expression. In this study we described the construction of subgenomic replicons of yellow fever virus by yeast-based homologous recombination technique. The plasmid containing the yellow fever 17D strain replicon (pBSC-repYFV-17D), previously characterized, was handled to heterologous expression of the green fluorescent protein (repYFV-17D-GFP) and firefly luciferase (repYFV-17D-Luc) reporter genes. Both replicons were constructed by homologous recombination between the linearized vector pBSC-repYFV-17D and the PCR product containing homologous 25 nucleotides ends incorporated into PCR primers. The genomic organization of these constructs is similar to repYFV-17D, but with insertion of the reporter gene between the remaining 63 N-terminal nucleotides of the capsid protein and 72 C-terminal nucleotides of the E protein. The replicons repYFV-17D-GFP and repYFV-17D-Luc showed efficient replication and expression of the reporter genes. The yeast-based homologous recombination technique used in this study proved to be applicable for manipulation of the yellow fever virus genome in order to construct subgenomic replicons.
Предметные рубрики MeSH
Подготовка и перевод публикации
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Тип публикации указан по данным источника. Уровень доказательности автоматически не присваивается.