MedElevator
Войти в исследования Проверка и использование внутреннего контроля мультиплекса RT-PCR в режиме реального времени для одновременного обнаружения энтеровирусов и энтеровирусов A71, связанных с болезнью ручной ноги и ротовой полости.
Аннотация
Заболевание ног и ротовой полости (HFMD) является болезнью, имеющей важное значение для здоровья населения во всем Азиатско-Тихоокеанском регионе. Болезнь вызывается интестивирусами (ЭМ), в частности энтеровирусом A71 (EV-A71). В связи с EV-A71, HFMD, инфекция иногда ассоциируется с серьезными проявлениями, включая неврологическое участие и смертельный исход. Наличие надежного диагностического анализа, позволяющего отличать ЭВ-А71 от других ЭМ, имеет важное значение для лечения пациентов и реагирования на вспышки.Мы разработали и утвердили внутриведомственный однотрубный RT-PCR в режиме реального времени с точки зрения чувствительности, линейности, точности и специфичности для одновременного обнаружения ЭМ и ЭВ-А71. Затем на горло и ректальные мазки были нанесены анализы 434 пациентов из числа ЛЖД.
Результаты
Анализ проводился с использованием как плазмидной ДНК, так и вирусной РНК и показал, что его можно воспроизвести с максимальным отклонением в 4,41% и чувствительностью при пределе обнаружения менее 10 копий шаблона цели на одну реакцию, в то время как перекрестная реактивность с другими серотипами ЭМ не была замечена. По сравнению с опубликованным VP1 в 2014 году RT-PCR с использованием 112 диагностических мазков на горле и ректальных мазков 112 детей с клиническим диагнозом HFMD, мультиплексный анализ имел более высокую чувствительность и 100-процентную согласованность с результатами последовательности, которые показали ЭМ в 77/112 (68,8%) и EV-A71 в 7/112 (6,3%). Что касается клинической диагностики 322 детей, то, согласно результатам анализа, ЭМ были обнаружены в мазках горла 257/322 (79,8%), из которых ЭВ-А71 был обнаружен в 36/322 (11,2%) детях. Коэффициент обнаружения увеличился до 93,5% (301/322) и 13,4% (43/322) для ЭМ и ЭВ-А71, соответственно, когда был проведен дополнительный анализ ректальных мазков у 65 детей, страдающих от отрицания горла.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Мы успешно разработали и утвердили чувствительный внутренний анализ множеств для быстрого обнаружения ЭМ и ЭВ-А71, который полезен для клинического управления и борьбы со вспышками ГФМ.
Название и аннотация на языке оригинала
Validation and utilization of an internally controlled multiplex Real-time RT-PCR assay for simultaneous detection of enteroviruses and enterovirus A71 associated with hand foot and mouth disease.
BACKGROUND
Hand foot and mouth disease (HFMD) is a disease of public health importance across the Asia-Pacific region. The disease is caused by enteroviruses (EVs), in particular enterovirus A71 (EV-A71). In EV-A71-associated HFMD, the infection is sometimes associated with severe manifestations including neurological involvement and fatal outcome. The availability of a robust diagnostic assay to distinguish EV-A71 from other EVs is important for patient management and outbreak response.
METHODS
We developed and validated an internally controlled one-step single-tube real-time RT-PCR in terms of sensitivity, linearity, precision, and specificity for simultaneous detection of EVs and EV-A71. Subsequently, the assay was then applied on throat and rectal swabs sampled from 434 HFMD patients.
RESULTS
The assay was evaluated using both plasmid DNA and viral RNA and has shown to be reproducible with a maximum assay variation of 4.41 % and sensitive with a limit of detection less than 10 copies of target template per reaction, while cross-reactivity with other EV serotypes was not observed. When compared against a published VP1 nested RT-PCR using 112 diagnostic throat and rectal swabs from 112 children with a clinical diagnosis of HFMD during 2014, the multiplex assay had a higher sensitivity and 100 % concordance with sequencing results which showed EVs in 77/112 (68.8 %) and EV-A71 in 7/112 (6.3 %). When applied to clinical diagnostics for 322 children, the assay detected EVs in throat swabs of 257/322 (79.8 %) of which EV-A71 was detected in 36/322 (11.2 %) children. The detection rate increased to 93.5 % (301/322) and 13.4 % (43/322) for EVs and EV-A71, respectively, when rectal swabs from 65 throat-negative children were further analyzed.
CONCLUSION
We have successfully developed and validated a sensitive internally controlled multiplex assay for rapid detection of EVs and EV-A71, which is useful for clinical management and outbreak control of HFMD.
Предметные рубрики MeSH
Подготовка и перевод публикации
Обработка статьи · этапы, ошибки и управление
Ошибки и ограничения
История · было → стало
Состояние обновляется каждые 5 секунд, пока блок открыт. Процент показывается только там, где известен объём работы. Пауза останавливает продолжение этапа; текущий запрос к источнику может завершиться.
Тип публикации указан по данным источника. Уровень доказательности автоматически не присваивается.